山羊卵泡卵体外成熟、体外受精及冷冻保存方法的研究

论文摘要

本文系统研究了山羊卵泡大小及卵母细胞的不同冷冻方法对体外成熟和体外受精的影响。主要结果如下: 1.随着卵泡直径增大,卵母细胞体外成熟率和体外受精率逐渐增高。直径≥5mm、3～4.9mm、2～2.9mm的卵泡卵母细胞的体外成熟率分别为76.85%、72.04%和62.26%;体外受精24小时后,卵裂率分别为10.74%、9.80%、6.47%。直径≥3mm的卵泡卵母细胞体外成熟率和体外受精率显著高于直径2～2.9mm的卵泡卵（P<0.05）。 2.不同直径卵泡卵母细胞,体外培养不同时间（0h、8h、16h、24h）后进行冷冻,解冻后形态正常率差异不显著（P>0.05）;继续培养至成熟,直径≥3mm的卵泡卵母细胞成熟率（18.41%～22.07%）显著高于直径为2～2.9mm的卵泡卵（10.13%～13.55%）（P<0.05）;体外受精24小时后,只有成熟后冷冻的卵母细胞解冻后受精有卵裂,直径≥5mm和3～4.9mm的卵泡卵裂率分别为6.38%和5.46%,显著高于直径2～2.9mm的卵泡卵2.16%（P<0.05）。 3.对于直径≥3mm且处于GV期的卵泡卵母细胞,采用四种方法冷冻,解冻后发现以EG作为冷冻保护剂,OPS管冷冻（简称EG-OPS组）的卵母细胞形态正常率为75.10%,显著高于EG-GMP组49.31%和甘油-OPS组58.75%（P<0.05）。甘油-GMP组为38.71%,显著低于其它组（P<0.05）;体外培养成熟后,EG-OPS组的成熟率18.84%显著高于EG-GMP组8.44%和甘油-OPS组8.12%（P<0.05）,后两组显著高于甘油-GMP组4.17%（P<0.05）。四组卵裂率均为0。 4.采用四种不同方法冷冻直径≥3mm且为IVM的卵泡卵母细胞,解冻后

论文目录

• 前言
• 材料与方法
• 1.卵巢的采集、处理与运输
• 2.卵巢组织的玻璃化冷冻
• 3.卵母细胞的获取
• 4.卵母细胞的体外培养
• 5.卵母细胞的冷冻和解冻
• 6.精液的获取
• 7.成熟卵母细胞的体外受精
• 8.卵母细胞体外成熟和体外受精的评定
• 9.卵巢组织的冷冻
• 10.卵巢组织的切片制作
• 11.主要试剂
• 12.操作液的配方
• 13.主要仪器设备
• 14.实验数据处理
• 结果与分析
• 1.卵泡大小对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响
• 2.不同发育阶段和不同直径卵泡卵母细胞冷冻后对体外成熟和体外受精的影响
• 3.不同冷冻保护剂和冷冻方法对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响
• 3.1 不同冷冻保护剂和冷冻方法对GV期卵母细胞体外成熟和体外精的影响
• 3.2 不同冷冻保护剂和冷冻方法对IVM卵母细胞体外成熟和体外精的影响
• 4.不同平衡时间对冷冻效果的影响
• 5.卵巢组织冷冻对其卵母细胞体外成熟和体外受精的影响
• 6.玻璃化冷冻对卵巢组织形态结构的影响
• 讨论
• 1.卵泡直径大小对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响
• 2.发育阶段和卵泡大小对卵母细胞冷冻解冻后体外成熟和体外受精的影响
• 3.不同冷冻方法对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响
• 4.卵巢组织冷冻对其卵母细胞体外成熟和体外受精的影响
• 结论
• 参考文献
• 附录：图片说明
• 致谢
• 研究生期间发表论文