1周启明（Zhouqiming）2李伟（Liwei）3文习之(Wenxizhi)深圳市第六人民医院肿瘤科
【摘要】目的：探讨自体CIK细胞过继性免疫治疗对晚期恶性肿瘤的临床疗效。方法：选择42例晚期恶性肿瘤患者作为研究对象，抽取50ml外周静脉血，分离单个核细胞，然后加入抗CD3单抗、IL-2、IFN-γ等细胞因子对其进行12~15天细胞培养，成功诱导扩增CIK细胞后回输患者体内，并对治疗前后生活质量、免疫功能和毒副反应进行比较，并检测治疗前后患者肿瘤标记物变化情况。结果：治疗后，患者的肿瘤标记物下降；失眠、食欲不振、疲倦乏力等临床症状均得到明显缓解（P＜0.05）；患者外周血中CD3、CD4T细胞和NK细胞水平均较治疗前显著升高（P＜0.05），并且毒副反应轻微。结论：自体CIK细胞过继性免疫治疗能显著提高患者免疫功能，改善生活质量，值得临床推广。
【关键词】恶性肿瘤；CIK细胞；过继免疫治疗
AnalysisonClinicalEfficacyofCIKCellsinAdvancedMalignantTumorsAbstract:Objective:TostudytheclinicaleffectofadoptiveimmunotherapywithautoologousCIKcellsinpatientswithadvancedmalignanttumors.Method:90caseswithadvancedmalignanttumorstreatedinourhospitalwerecollectedastheresearchobject.Peripheralblaodmononuclearcellswereisolated，andthenwereincubatedinvitrowithanti-CD3monclonalantibod,IL-2andIFN-γ12to15days．SuccessfulinducedaugmentationCIKcellsweretransfusedbacktothepatientswiththreetimes.Clinicalcurativeeffectandsidereactionstatisticscomparisonbeforeandaftertreatmentwereanalyzed,andimmunologyindexchangesweretested.Result:Aftertreatment,肿瘤标记物gotdown.Thelackofclinicalsymptomssuchasinsomnia,lossofappetiteandfatiguewereobviouslyalleviat(P<0.05).CD3,CD4TcellsandNKcelllevelinperipheralbloodwereobviouslyhigherthanbeforetreatment(P<0.05).Andadversereactionwasslight.Conclusion:AdoptiveimmunotherapywithautoologousCIKcellsinpatientswithadvancedmalignanttumorscanremarkablyimprovetheimmunefunction,improveclinicalsymptoms.Itisworthofclinicalpromotion.Keywords:Malignanttumors;CIKcells;Adoptiveimmunotherapy
生物治疗在肿瘤的临床治疗中发挥了重要作用，目前已成为治疗恶性肿瘤的第四大手段。自体细胞诱导的杀伤细胞（CIK）是一类增殖能力强、对多重耐药肿瘤细胞有很强杀伤活性的肿瘤生物治疗免疫活性细胞，主要表达T细胞标记的CD3细胞和NK细胞标记的CD56细胞。大量基础研究表明[1-5]，连续回输CIK细胞可以在不损伤机体免疫功能的前提下，对肿瘤细胞进行直接杀伤，并且能够提高机体免疫力。自体CIK细胞过继性免疫治疗是一种从肿瘤患者外周血中分离多种效应细胞，体外诱导培养后回输体内，以提高临床疗效，改善生活质量的生物治疗手段。我院近年来对恶性肿瘤患者给予自体CIK细胞过继性免疫治疗，取得了不错的临床疗效，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料以我院2010年6月至2012年2月期间收治的42例晚期恶性肿瘤患者为研究对象，均经病理或细胞学检查确诊为恶性肿瘤，根据国际抗癌联盟制定的肿瘤分期标准，所有病例均为Ⅳ期，均有可测量的肿瘤病灶，预计生存期均＞3个月，Karnofsky评分≥60分。其中男性24例，女性18例，年龄36~82岁，平均年龄（58.3±9.6）岁。肺癌14例，结肠癌8例，原发性肝癌6例，直肠癌5例，乳腺癌4例，其它5例。在CIK细胞治疗前有30例患者接受过化疗，占71.4%，有12例患者接受过放疗，占28.6%，放化疗与CIK细胞生物治疗间隔均在1月以上。合并严重肝肾功能不全、急慢性感染、精神障碍、免疫系统疾病等患者均已排除在外。接受治疗前均已签署治疗知情同意书。
1.2方法
1.2.1CIK细胞体外培养清晨空腹状态下抽取外周静脉血50ml，以淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，洗涤3次后用含10%人AB血清的RPMI1640培养基调节密度至1~2×106/ml后进行培养。培养箱内条件设为：37℃，5%浓度的CO2。培养第1天加入重组人IFN-γ，浓度调至2000U/ml;第2天加入rhIL-2，调节浓度至1000U/ml，并加入浓度为50ng/ml的CD3MaAb。定期更换培养液，1次/3天，记录细胞的生长情况。
1.2.2CIK细胞的鉴定与质量控制单个核细胞培养1周后进行计数，并检测细胞活度，根据培养量计算出CIK细胞总数。对诱导培养扩增的CIK细胞进行细胞表型分析和细胞杀伤活力测定，同时对安全性进行评价。
1.2.3细胞回输细胞培养13~15d后，收集合格的CIK细胞，洗涤3次，配成250ml液体（含5%的人血白蛋白、1000U/ml的IL-2）后回输入患者体内，每次回输细胞总量2~5×109，1次/2天，1疗程/3次。
1.3观察指标①肿瘤标记物及外周血T细胞亚群的变化情况。②观察治疗后患者临床症状改善情况，包括睡眠、食欲、精神状态等。评价标准：显著改善（临床症状积分值下降≥2/3）、部分改善（积分下降在1/3~2/3之间）、无改善（积分下降＜1/3）。③治疗后参照实体瘤疗效标准，结合B超、CT等常规检查对临床疗效进行评价，分完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、轻度缓解（MR）、稳定（SD）、进展（PD），CR、PR、MR计为有效。④观察患者在回输过程中、及加输后24小时内的毒副反应情况，包括发热、乏力、皮疹、呕吐、烦躁等。
1.4统计学处理应用SPSS17.0软件对数据进行统计分析，计量资料应用t检验，计数资料应用c2检验，检验标准以P<0.05表示有统计学意义。
2结果
2.1肿瘤标志物测定经CIK细胞治疗后，36例CEA升高的患者有28例下降，8例稳定，6例AFP升高的患者均下降，4例CA125升高的患者有3例下降，1例稳定。
2.2治疗前后T细胞亚群变化治疗后，患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及NK细胞（CD16+、CD56+）均较治疗前显著升高，CD8+下降，统计学均有显著性差异（P＜0.05），见表1。
表1治疗前后T细胞亚群变化（x±S）