体外模拟的二氧化碳气腹环境对卵巢癌SKOV3凋亡、侵袭能力的影响的实验研究

论文摘要

研究背景腹腔镜手术与传统的开腹手术比较，具有手术效果好、术后患者疼痛少、康复快等优点，目前已逐步成为治疗良性妇科疾病的重要术式。随着腔镜技术的发展，腹腔镜在妇科恶性肿瘤中的应用（如早期卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌等的手术）也逐渐开展并越来越受到关注。腹腔镜技术用于恶性肿瘤手术后，手术安全性，特别是术后出现穿刺点种植和腹腔肿瘤转移、播散，这一问题已引起人们广泛关注，并为此进行深入研究。有研究表明，与开腹组比较，CO2气腹作用下裸鼠腹壁切口转移瘤频发、瘤体更大，腹腔内脏器肿瘤种植、播散情况更严重。CO2气腹对肿瘤细胞生长可能有潜在促进作用。但也有相反的报道，如Canis等运用非免疫缺陷鼠的肿瘤模型对CO2气腹的研究，发现开腹组肿瘤生长更大，但腹腔肿瘤播散却是气腹组更严重。CO2引起肿瘤复发及转移的机制亦众说纷纭，分别从酸中毒、免疫损伤、机械物理损伤等方面阐述。目前关于转移因子、黏附分子的分子生物学研究国内外鲜有报道。第一章二氧化碳对卵巢癌细胞株SKOV3抗凋亡因子XIAP和PED／PEA-15表达的影响目的：探讨二氧化碳（CO2）气腹对卵巢癌细胞株SKOV3抗凋亡因子XIAP和PED／PEA-15表达的影响，进一步探讨CO2气腹环境对SKOV3细胞凋亡能力的影响，为CO2气腹腹腔镜手术在卵巢癌中应用的安全性作出评价。方法：建立体外模拟CO2气腹环境，将人卵巢癌细胞株SKOV3分别暴露于不同压力（8～12mmHg）的CO2环境中，持续1h、2h、3h后，脱离CO2环境，放入常规CO2培养箱（37℃，5％CO2）中培养，分别于培养24h、48h、72h；这期间作为对照组的SKOV3细胞一直放于常规培养箱中。采用实时荧光定量PCR法及免疫细胞化学法检测各组SKOV3细胞XIAP、PED／PEA-15 mRNA和蛋白的表达。应用统计学方法对所得数据进行分析。结果：SKOV3细胞置于不同的CO2气腹环境后，与对照组比较：SKOV3细胞XIAP、PED／PEA-15的表达明显增加（P值均＜0.05），并且与CO2压力和作用时间有关。（1）不同CO2压力、作用时间及培养时间下XIAP、PED／PEA-15 mRNA表达量均显著高于对照组（P＜0.01），且CO2压力、作用时间之间存在正交互作用（P＜0.01）。在CO2作用时间和培养时间相同时随CO2压力增大，XIAP、PED／PEA-15 mRNA增多，10mmHg时达峰值，12mmHg时开始下降，平均表达量低于8mmHg（P＜0.01）：在相同的CO2压力和培养时间下，随CO2环境作用时间延长，XIAP mRNA的表达量在前两个小时平均值无差异性，作用时间为3小时较前两小时增多，而PED／PEA-15 mRNA的表达量逐渐增多，2h达到高峰，随后逐渐下降。（2）析因设计方差分析结果显示不同的CO2压力、作用时间以及培养时间之间的XIAP、PED／PEA-15蛋白表达量均有显著性差异（P＜0.05），具体变化规律与mRNA表达相一致，并且CO2压力、作用时间之间存在正交互作用（P＜0.01），其它因素互相间无交互作用（P值均＞0.05），以上各组与对照组比较均有显著差异性（P＜0.01）。结论：CO2气腹环境可促进SKOV3细胞中抗凋亡因子XIAP、PED／PEA-15表达增加，从而抑制细胞凋亡，促进肿瘤生长。意义：XIAP、PED／PEA-15的变化与CO2作用压力及时间密切相关，提示我们在临床上可控制气腹机压力及手术时间，并可从凋亡分子的水平上积极干预以避免CO2气腹的不良作用，进而推广腹腔镜在恶性肿瘤中的应用。第二章持续二氧化碳气腹环境对卵巢癌细胞黏附、侵袭能力影响的实验研究目的：建立体外模拟腹腔镜二氧化碳（CO2）气腹的手术环境，探讨其对卵巢癌细胞株SKOV3黏附、侵袭能力的影响及其作用机制。方法：将人卵巢癌细胞株SKOV3分别暴露于不同压力（8～12mmHg）的CO2环境中，持续1h、2h、3h后，脱离CO2环境，放入常规CO2培养箱中培养，分别于培养24h、48h、72h；这期间作为对照组的SKOV3细胞一直放于常规培养箱中。（1）计算各组细胞黏附数；（2）采用实时荧光定量PCR法及免疫细胞化学法检测各组SKOV3细胞CD44v6、MMP-9及E-cad mRNA和蛋白的表达。采用SPSS13.0软件进行统计分析。检测数据以均数±标准差（（?）±s）表示，与对照组比较采用t检验；各处理组间比较用析因设计多因素方差分析。结果：SKOV3细胞置于不同压力、不同时间的CO2气腹环境后：（1）SKOV3细胞的黏附能力显著高于对照组，在CO2压力为10mmHg时、持续作用2h、培养48h后达到一个最高值（P值均＜0.05）。（2）SKOV3细胞CD44v6和MMP-9的表达明显高于对照组，分别在CO2压力为10mmHg、持续作用1h、培养72h后和在CO2压力为10mmHg、持续作用2h、培养48h后达到一个最高值（P值均＜0.01）；E-cad表达少于对照组（P值＜0.05），各实验组间比较无显著差异性（P值均＞0.05）。结论：CO2环境可增加SKOV3细胞的黏附力和侵袭性，与CD44v6、MMP-9表达增加和E-cad表达减少有关。意义：CO2环境增加了SKOV3细胞的黏附、侵袭能力，与其压力和时间均有密切关系，提示我们在临床工作中可以通过调节气腹机的压力及控制适当的手术时间来减轻其不良作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 一、对妇科肿瘤的影响
• 2气体促进肿瘤种植及转移有关机制的国内外研究现状'>二、CO₂气体促进肿瘤种植及转移有关机制的国内外研究现状
• 三、存在的争议
• 四、细胞凋亡
• 五、肿瘤转移
• 六、结论
• 第一章 二氧化碳对卵巢癌细胞株SKO3V抗凋亡因子XIPA和PEP/PEA-15表达的影响
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图表
• 第二章 体外模拟的二氧化碳气腹环境对卵巢癌细胞 勃附、侵袭能力的影响
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 致谢
• 在读期间发表论文
• 学位论文评阅及答辩情况表