视网膜周细胞对微血管内皮细胞生长和紧密连接形成影响的研究

论文摘要

研究背景 新生血管性视网膜病变常见于增生性糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病变等，是一类危害严重的致盲性眼病，也是当前研究的热点。其共同的特征是形成病理性视网膜新生血管(retinal neovascularization，RNV)，这些血管失去正常的生长抑制，缺乏重建和成熟，渗漏性强，是导致视网膜水肿、出血和增殖等病变的根本原因。 视网膜微血管壁由两种细胞组成：视网膜周细胞(retinal pericytes，RPCs)和视网膜微血管内皮细胞(retinal microvascular endothelial cells，RMECs)。RNV的生成是一个由内皮细胞和周细胞相互作用，众多细胞因子和信号途径时序性参与和制约的多步骤、复杂过程。两种细胞相互作用的平衡对正常的血管生成和维持至关重要，一种细胞的损害会影响另一种细胞。在血管生成中，内皮细胞处于主导地位，既往的研究绝大多数集中于内皮细胞，对其作用已有了较多的认识。周细胞作为血管生成和血管功能的重要调节细胞，尤其在糖尿病视网膜病变中周细胞作为首发的受损细胞，使其成为目前研究的焦点。 从一定意义上讲，RNV的形成是视网膜对缺血缺氧的一种紧急代偿，但这种代偿失去了正常血管生成的调控和抑制机制，从而产生了管壁结构不健全、易渗漏的新生血管。目前消除新生血管的治疗，如抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表达、激光光凝视网膜无灌注区等，虽然在一定程度上能缓解视网膜水肿、出血等病变带来的视力损害，但同

论文目录

• 缩略语表
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• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 1 免疫磁珠法原代纯化视网膜周细胞及内皮细胞培养和鉴定
• 1.1 主要仪器设备试剂
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 免疫磁珠原代分离周细胞
• 1.2.2 细胞传代
• 1.2.3 细胞形态观察及活力实验
• 1.2.4 免疫组化鉴定
• 1.2.5 细胞生长曲线测定
• 1.2.6 细胞冻存和复苏
• 1.3 结果
• 1.3.1 细胞形态学特点
• 1.3.2 细胞免疫化学鉴定
• 1.3.3 细胞生长规律
• 1.4 讨论
• 1.4.1 周细胞分离纯化方法改进
• 1.4.2 周细胞鉴定
• 2 周细胞对内皮细胞增生移行管腔形成的影响及Flk-1调节
• 2.1 仪器和试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 建立细胞共培养系统
• 2.2.2 周细胞条件培养液制备
• 2.2.3 细胞缺氧模型
• 2.2.4 细胞增生实验
• 2.2.5 细胞移行实验
• 2.2.6 细胞管腔形成实验
• 2.2.7 RT-PCR
• 2.2.8 统计学分析
• 2.3 结果
• 2.3.1 共培养系统的建立
• 2.3.2 共培养细胞MTT比色实验
• 2.3.3 共培养细胞FCM细胞周期测定
• 2.3.4 共培养内皮细胞Flk-1mRNA水平
• 2.3.5 PCM对内皮细胞增生影响MTT实验
• 3H-TdR掺入实验'>2.3.6 PCM对内皮细胞增生影响³H-TdR掺入实验
• 2.3.7 PCM对内皮细胞移行的影响
• 2.3.8 PCM对内皮细胞管腔形成的影响
• 2.2.9 PCM对内皮细胞Flk-1表达影响
• 2.4 讨论
• 2.4.1 周细胞对内皮细胞增生的影响
• 2.4.2 PCM对内皮细胞增生和管腔移行的影响
• 2.4.3 周细胞通过Flk-1途径调节内皮生长
• 3 周细胞及其衍生的Angl对内皮细胞紧密连接的影响
• 3.1 材料和设备
• 3.1.1 主要设备
• 3.1.2 主要试剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 处理因素
• 3.2.2 实验分组
• 3.2.3 免疫荧光染色
• 3.2.4 Western blot检测
• 3.2.5 RT-PCR检测
• 3.2.6 统计学分析
• 3.3 结果
• 3.3.1 免疫荧光染色
• 3.3.2 Western blot
• 3.3.3 RT-PCR
• 3.3.4 不同浓度Angl对内皮细胞表达occludin影响
• 3.4 讨论
• 3.4.1 常氧下PCM及Angl抗体对TJs表达影响
• 3.4.2 缺氧下PCM及Angl抗体对TJs表达影响
• 3.4.3 Angl对内皮TJs表达影响
• 小结
• 参考文献
• 附图
• 个人简历和研究成果
• 致谢