调节性T细胞及相关细胞因子在系统性红斑狼疮外周血中的表达及临床意义初探

论文摘要

研究背景系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）是一种以全身免疫异常而导致多器官受累的自身免疫性疾病。其病因和发病机制尚不完全清楚,可能与遗传、环境、性激素、感染及药物等因素有关。目前治疗药物仍以糖皮质激素和（或）免疫抑制剂为主,但药物的长期应用常给患者带来严重的不良反应。目前能够反映SLE病情严重程度和监测疾病活动性的指标主要有：临床症状、血、尿常规、血沉、抗ds-DNA抗体滴度及SLE疾病活动指数（SLEDAI）等。但上述指标仅从靶器官的受损和恢复情况反映疾病的活动情况,不能真正反映治疗对靶器官即时作用,具有一定的滞后性,目前尚没有能从细胞或分子水平直接监测病情活动,并指导临床用药的指标,故探索有效的细胞或分子水平的疾病活动指标,对进一步明确SLE的发病机制,寻求更好的监测病情的指标,改良现有的治疗方案或寻找新的治疗方法具有重要的意义和价值。既往研究表明,SLE的发病与机体体液免疫和细胞免疫功能的异常均有关,主要表现为T淋巴细胞功能紊乱促进了B淋巴细胞的高度活化,从而产生大量的自身抗体,形成免疫复合物,激活了补体,临床上表现为多种器官的受损。在这一系列异常免疫反应中,T淋巴细胞功能紊乱在启动免疫异常的过程中具有关键性的作用,是SLE发病的始动因素。调节性T细胞（regulatory T cell, Treg）是一组具有免疫抑制功能的T细胞亚群,研究者发现其在自身免疫疾病、器官移植、肿瘤免疫、慢性炎症反应及持续感染等中均发挥重要作用。调节性T细胞具有免疫抑制和免疫无能两大特征,对机体免疫应答具有负调节功能。主要通过直接接触或分泌抑制性细胞因子,直接和间接抑制抗原特异性T细胞的增殖、分化以及活性,使免疫应答不至于过于强烈,从而起到防止自身免疫性疾病发生的作用。调节性T细胞中最受关注的有Tr1, Th3和CD4+CD25+Treg等。CD4+CD25+Treg被认为是Treg家族中最主要的一群,Foxp3 （叉头状/翼状螺旋转录因子）是CD4+ CD25+Treg最特异标记,在调节性T细胞的发育和发挥功能过程中起到关键作用。越来越多的研究表明,CD4+CD25+Treg和Foxp3数量和功能的异常可能与SLE的发生发展有着密切的关系。正常情况下,效应性T细胞对外界刺激的增殖反应能够被调节性T细胞反馈抑制。调节性T细胞可能是机体以“主动”方式控制自身反应T细胞活化和增殖的主要途径,该类细胞的数量缺乏或功能缺陷均会影响自身免疫环境的稳定,从而出现自身免疫性疾病。众所周知,细胞因子之间存在复杂的相互作用的关系。在体内,细胞因子以网络的形式广泛地参与免疫调节。很多研究表明,细胞因子的失衡在SLE发病中起重要的作用。体外研究表明调节性T细胞在自身免疫病中抑制功能的发挥可能与细胞间直接接触有关,体内实验研究提示其抑制功能可能有赖于一些细胞因子的参与,如白细胞介素-6（IL-6）、转化生长因子β1 （TGF-β1）、白细胞介素-10 （IL-10）、γ干扰素（IFN-γ）等。白介素6（IL-6）是一种具有多重免疫调节功能的细胞因子。T淋巴细胞系、单核细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞以及某些肿瘤细胞均可产生IL-6。某些急性炎症、自身免疫性疾病、淋巴细胞恶性肿瘤（如多发性骨髓瘤）等病人体内IL-6水平均明显增高。转化生长因子β1 （TGF-β1 ）主要由活化的T细胞、B细胞和巨噬细胞合成和分泌,某些肿瘤细胞、成骨细胞以及内皮细胞也可产生。TGF-β1是一类具有双向调节功能的生长因子,既具有抗炎作用,也有促炎作用,广泛参与免疫系统细胞之间的相互作用。SLE作为一种典型的自身免疫病,调节性T细胞和细胞因子在疾病发生发展中的作用倍受学者们的关注。目前,对调节性T细胞和细胞因子在SLE发病中的作用认识尚未完全清楚,两者在SLE中的相互关系研究较少。而且调节性T细胞在SLE研究中的结论并不一致,大部分结论表明与正常人相比,SLE中调节性T细胞数量降低,但也有结论表明没有差异甚至升高。因此,进一步研究CD4+CD25+Foxp3+Treg及其相关细胞因子在SLE患者中的表达水平及其临床意义,可能会对阐明SLE的发病机制及制定新的治疗方案均有重要参考价值。目的测定SLE患者外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的百分率,以及血清中IL-6、TGF-β1的含量,分析它们与SLEDAI的关系,同时分析调节性T细胞与细胞因子相互之间的关系,进一步探讨它们在SLE中的临床意义。方法选取门诊及住院SLE患者34例（其中活动性20例,非活动性14例）,均符合1997年美国风湿病学会（ACR）修订的SLE诊断标准。健康对照组者15例。应用流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg及CD4+CD25+Foxp3+Treg的百分率。用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测SLE患者以及正常对照组血清IL-6、TGF-β1水平。分别计算并比较各组CD4+CD25+Treg及CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的百分比值及血清IL-6、TGF-β1水平的差异。结果1.外周血CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞百分比值：SLE活动组、稳定组及正常对照组CD4+CD25+/CD4+T的水平分别为：4.0515%±2.39635%,6.1829%±2.35146%,7.9593%±3.42551%。SLE活动组CD4+CD25+Treg细胞数显著低于SLE稳定组及正常对照组（P值分别为0.03和0.000）,稳定组水平也低于正常对照组,但差异无显著意义（P>0.05）。2.外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞百分比值：SLE活动组、稳定组及正常对照组CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T的水平分别为：2.1597%±1.12888%、5.1603%±1.65242%、6.1687%±3.4745%。SLE活动组CD4+CD25+Foxp3+/CD4+Treg细胞比值显著低于SLE稳定组和正常对照组（P值均为0.000）,稳定组的水平也低于正常对照组,但差异无显著意义（P>0.05）。3. CD4+CD25+Foxp3+Treg与SLEDAI呈显著负相关（r=-0.636,P=0.000）,但与CD4+CD25+Treg与SLEDAI无显著相关性（P>0.05）。4.血清IL-6的表达：SLE活动组、稳定组及正常对照组的表达水平分别为：36.61±9.73 （ng/ml）,28.24±4.69 （ng/ml）,22.37±5.60 （ng/ml）。SLE活动组IL-6的水平显著高于SLE稳定组及正常对照组（P值分别为0.007和0.000）,SLE稳定组的水平显著低于正常对照组（P=0.015）5.血清中TGF-β1的表达：SLE活动组、SLE稳定组及正常对照组的表达水平分别为89.53±23.94 （ng/ml）,111.64±18.86 （ng/ml）,118.58±19.73 （ng/ml）。SLE活动组TGF-β1的表达显著低于SLE稳定组及正常对照组（P值分别为0.005和0.000）,稳定组的水平也低于正常对照组,但差异无统计学意义（P>0.05）。6. IL-6与SLEDAI呈显著正相关（r=0.532, P=0.001）;与CD4+CD25+/CD4+Treg比值成显著负相关（r=-0.636, P=0.000）;与CD4+CD25+Foxp3+/CD4+Treg比值呈负相关,但相关性很弱（r=-0.372,P=0.008）7. TGF-β1与SLEDAI呈显著负相关（r=-0.663,P=0.000）；与CD4+CD25+/CD4+Treg比值呈显著正相关（r=0.426, P=0.002）;与CD4+CD25+Foxp3+/CD4+Treg比值呈正相关,但相关性很弱（r=0.300,P=0.036）。结论1.SLE活动组外周血CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+Treg水平均明显低与SLE稳定组及正常对照组,提示调节性T细胞的数量减少在SLE的发病中可能起到重要作用。2. CD4+CD25+Foxp3+Treg可能比CD4+CD25+Treg能更敏感地反映SLE病情的活动程度,其表达水平可能成为SLE病情活动度的检测的指标之一。3.上调调节性T细胞的数量有可能为SLE的治疗提供新思路。4. SLE血清中IL-6的升高及TGF-β1的降低,可能均导致CD4+CD25+Treg及CD4+CD25+Foxp3+Treg数量的减少。5.SLE血清中IL-6及TGF-β1表达的变化及与SLEDAI的相关性,可能提示IL-6、TGF-β1在SLE的发病机制中起到重要作用。6.纠正血清中IL-6、TGF-β1等细胞因子的失衡有可能为SLE的治疗带来新方向。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 参考文献
• 第一章 调节性T细胞在系统性红斑狼疮患者外周血中的表达及意义
• 1 资料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 第二章 系统性红斑狼疮患者血清中IL-6、TGF-β1的表达及意义
• 1 资料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 全文小结
• 附录
• 致谢
• 统计学审稿证明