抑制血红素氧合酶-1对大鼠免疫性肝纤维化的影响

论文摘要

目的:血红素氧合酶（Heme Oxygenase,HO）是人类和哺乳动物组织器官中广泛存在的一种加氧酶,是催化血红素的起始酶和限速酶,有着重要的生物学作用。HO-1是HO的一种同工酶,近年的研究证实HO-1及其酶解产物协同发挥着抗炎、抗氧化、抑制细胞凋亡等作用,广泛参与心、脑、肺、肝、肾等组织细胞的抗氧化应激损伤,是机体最重要的内源性保护体系之一。有研究显示,HO-1在肝移植、急性肝损伤和缺血再灌注损伤等多种肝脏损害中,对肝细胞均具有保护作用。锌原卟啉可抑制HO-1活性,限制血红素转化为胆绿素。本研究的目的就是通过锌原卟啉抑制HO-1的表达,观察肝纤维化大鼠HO-1的表达与肝脏功能及形态学变化的关系,探讨HO-1对免疫性肝纤维化大鼠的肝脏是否具有保护作用,为今后的临床治疗提供实验依据。方法:选取52只雄性SD成年大鼠,体重220～270g,随机分为三组:正常对照组12只、肝纤维化组20只和锌原卟啉组20只。肝纤维化组和锌原卟啉组应用人体血清白蛋白建立免疫性肝纤维化模型,锌原卟啉组在每次尾静脉攻击同时给予锌原卟啉（5mg/kg）腹腔注射,6周后将所有大鼠处死。免疫组化和western blotting法观察肝组织中HO-1的表达。采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶（ alanine aminotransferase , ALT ）、天门冬氨酸氨基转移酶（ aspartate amino transferase,AST）、白蛋白（albumin,Alb）等反映肝功能。采用γ放射免疫计数器测定血清透明质酸（ Hyaluronic acid, HA）、层粘蛋白（laminin,LN）、Ⅲ型前胶原肽（TypeⅢprocollagen,PCⅢ）、Ⅳ-型胶原（Ⅳcollagen,Ⅳ-C）等反映肝纤维化程度。通过HE染色、VG染色、Foot氏网状纤维染色等三种染色方法观察肝细胞变化、炎细胞浸润情况、汇管区、纤维间隔以外的肝细胞间梭形细胞数目、纤维组织增生程度等组织形态学改变。结果:1.免疫组化结果提示:与正常对照组比较,肝纤维化组肝组织的HO-1表达范围明显扩大,强度明显加强;锌原卟啉组较正常对照组HO-1表达范围也明显扩大,但强度较肝纤维化组减弱。2.Western blotting结果提示:与正常对照组比较,肝纤维化组肝组织的HO-1表达明显增加（P<0.01）。应用锌原卟啉处理降低了肝纤维化时HO-1的表达（P<0.05）,但锌原卟啉组仍比正常对照组高（P<0.01）。3.肝功能指标测定:三组间Alb均无显著性差异（P>0.05）。与正常对照组比较,肝纤维化组肝功能指标ALT、AST均明显升高（P<0.01）,而锌原卟啉组高于肝纤维化组（P<0.05）。4.肝纤维化指标测定:与正常对照组比较,肝纤维化组均明显升高（P<0.01）,而锌原卟啉组均高于肝纤维化组（P<0.05）。5.病理学检查结果:肝纤维化组、锌原卟啉组与正常对照组相比,细胞呈现一定程度的水肿变性（浊肿）,两组均未见肝细胞坏死,但锌原卟啉组略重。锌原卟啉组淋巴细胞浸润明显,肝细胞间梭形细胞数目较肝纤维化组、正常对照组明显增多。与正常对照组相比,肝纤维化组成纤维细胞、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原增生程度明显加重（P<0.01）。与肝纤维化组相比,锌原卟啉组成纤维细胞、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原增生程度更重,有显著性差异（P<0.01）。结论:1.在免疫性肝纤维化模型中,HO-1呈高水平表达,给予抑制剂锌原卟啉处理后,肝脏HO-1的表达降低。2.在免疫性肝纤维化模型中,肝功能损伤较轻,胶原纤维增生明显。3.在免疫性肝纤维化模型中,应用锌原卟啉处理后,肝纤维化指标升高,肝纤维化程度加重。4.在免疫性肝纤维化模型中,应用锌原卟啉处理后,肝细胞出现水肿变性,淋巴细胞浸润明显,肝细胞间梭形细胞数目明显增多,肝纤维化程度加重。5.HO-1可能参与了免疫性肝纤维化的病理生理过程,并对肝脏起保护作用。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢