罗格列酮对人结肠癌HT-29细胞氟尿嘧啶化疗增敏作用实验研究

论文摘要

目的：探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor gammar,ppary）配体罗格列酮（Rosiglitazone）对人结肠癌氟尿嘧啶化疗增敏作用。方法：体外培养人结肠癌HT-29细胞,分别或联合应用不同浓度的罗格列酮、氟尿嘧啶（fluorouracil,5-Fu）处理人结肠癌细胞系（HT-29）细胞,MTT比色法测定药物对细胞增殖抑制作用,台盼蓝染色细胞计数法观测药物对HT-29细胞生长曲线的影响,PI染色流式细胞术（FCM）分析、吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）荧光染色法观察细胞凋亡率。用Western blot法检测HT-29细胞PPARyγ、NF-KB、Bcl-2、Bax的表达。初步探讨罗格列酮对人结肠癌氟尿嘧啶化疗增敏作用的分子机制。结果：（1）MTT比色法结果显示5-Fu对HT-29细胞增殖具有抑制作用,其IC50为8.05μg/ml,罗格列酮对HT-29细胞增殖亦有抑制作用,其IC5o为140.7μmol/L;无细胞毒浓度（1.0μmol/L）罗格列酮能显著增强5-Fu对HT-29细胞增殖抑制作用,联合应用时IC5o为1.66μg/ml。罗格列酮与5-Fu合用的CI值为0.218,CI小于1,表明罗格列酮和氟尿嘧啶合用具有协同作用。（2）台盼蓝染色细胞计数法显示：罗格列酮抑制体外培养的HT-29细胞生长,且呈明显的剂量-时间依赖方式；1.0、10.0μmol/L罗格列酮对HT-29细胞无显著毒性作用（IR<10%）,其与5-Fu合用时能增强5-Fu对HT-29细胞生长抑制作用；与细胞计数绘制生长曲线结果一致。无细胞毒浓度1.0μmol/L罗格列酮能够显著增强6.0μg/ml 5-Fu对HT-29细胞的生长抑制,使HT-29细胞群体倍增时间延K至900小时,比DMSO对照组延长15倍。（3）AO/EB荧光双染色法和流式细胞术结果显示：5-Fu能明显诱导HT-29细胞凋亡,呈剂量依赖性。3.0,6.0,12. Oμmol/mL处理HT-29细胞72h,细胞凋亡率分别为13.91%,18.16%,23.14%,罗格列酮亦能诱导HT-29细胞凋亡,呈剂量依赖性。1.0,10.0,100.罗格列酮处理HT-29细胞72h后,细胞凋亡率分别为1.44%,2.34%,14.13%。无细胞毒浓度的罗格列酮能显著促进5-Fu诱导HT-29细胞凋亡1.0μmol/L罗格列酮与12.0μg/ml 5-Fu合用使HT-29细胞凋亡率高达48.41%。（4） Werstern blot法结果显示HT-29细胞表达PPARγ,罗格列酮作用HT-29细胞后上调PPARγ和Bax蛋白的表达,下调NF-κB、Bcl-2蛋白的表达,且呈浓度依赖性（P<0.05）。结论：（1）无细胞毒浓度下（1. 0μmol/L）罗格列酮能增强5-Fu对HT-29细胞的生长增殖抑制作用。（2）无细胞毒浓度下（1.0μmol/L）罗格列酮能促进5-Fu诱导HT-29细胞凋亡。（3）罗格列酮的化疗增敏作用可能与活化PPARγ,下调NF-κB、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 HT-29细胞
• 1.2 主要试剂
• 1.3 仪器设备
• 1.4 主要试剂配制
• 1.5 细胞培养
• 1.6 MTT比色法测定罗格列酮、5-FU对HT-29细胞增殖活性的影响
• 1.7 台盼蓝染色细胞计数法观察罗格列酮、5-FU对HT-29细胞生长抑制、生长曲线和群体倍增时间的影响
• 1.8 AO荧光染色显微镜观察细胞凋亡
• 1.9 PI染色流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率
• 1.10 Western blot分析
• 1.11 统计学处理
• 第二章 结果
• 2.1 MTT比色法测定罗格列酮、5-Fu及两者合用对HT-29细胞增殖活性的影响
• 2.2 罗格列酮、5-Fu及两者合用对HT-29细胞生长曲线的影响
• 2.3 PI染色FCM测定罗格列酮、5-Fu对HT-29细胞凋亡和周期的影响
• 2.4 AO/EB荧光染色法测定罗格列酮、5-Fu对HT-29细胞凋亡的影响
• 2.5 Western blot法测定罗格列酮对HT-29细胞的PPARγ、NF-κβ、Bcl-2、Bax的表达影响
• 附图
• 第三章 讨论
• 3.1 罗格列酮对HT-29细胞的作用及可能机制
• 3.2 罗格列酮增加HT-29细胞对5-Fu的敏感性及可能机制
• 3.3 展望
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述 1
• 参考文献
• 综述 2
• 参考文献
• 致谢