红花黄酮类化合物对酪氨酸酶抑制作用的研究

论文摘要

红花是一种常见的活血化瘀的中药,也是一种药食同源的植物。红花中含有多种营养成分和生物活性物质,其中,黄酮类化合物含量丰富。研究发现黄酮类化合物是一类有效的酪氨酸酶抑制剂。本文对红花黄酮类化合物（Safflower Flavonoids,SF）的制备工艺进行优化,研究其对酪氨酸酶的抑制活性和其对苹果切片的保鲜效果。1对SF的微波提取工艺进行了探讨。实验采用单因素实验与正交实验,分别考察了乙醇浓度、微波时间、微波功率、微波温度及料液比对SF提取率的影响。实验结果表明最佳的提取条件为:乙醇浓度60%,料液比1:35,微波功率800W,微波时间25min,微波温度50℃,提取2次,得到红花黄酮粗提物（Safflower Flavonoid Extracts,SFE）。在此条件下,SF的提取率达到10.231%。2比较4种大孔树脂对SFE的吸附与解吸效果,从中筛选出适合SFE分离纯化的树脂,并通过单因素实验对其吸附与解吸工艺进行探讨。得到结论为:AB-8是纯化红花总黄酮较好的树脂。静态吸附:最佳树脂用量是1:10（g/m L）,最佳上样浓度为3mg/mL,最适pH值为4.7,吸附6h,解吸时间4h;动态吸附:上样流速为2BV/h,上样浓度为3mg/m L,70%乙醇以2BV/h流速进行洗脱。用优化出的条件进行SF的纯化,得到红花黄酮纯提物（Safflower Flavonoid Purfication,SFP）的黄酮纯度63.31%,比纯化前的21.85%提高2.89倍。3研究了SFP对酪氨酸酶的抑制及其机理。以L-酪氨酸为底物,对SFP抑制酪氨酸酶活性进行动力学研究,并研究SFP清除自由基和螯合金属离子的作用,探讨其对酪氨酸酶的抑制机理。结果表明,在实验浓度范围内,SFP对酪氨酸酶均具有抑制性,且当红花黄酮提取物浓度为3.0mg/mL时,抑制率达到最大值78.03%;IC50值为0.834mg/mL,抑制常数KI为0.036mg/mL,KIS为0.0064mg/mL。当SFP的浓度为3mg/mL时,SFP对酶的抑制率达63.5%。另外,SFP对DPPH·,羟基自由基和超氧阴离子均具有一定清除力;Cu2+、Fe2+与红花黄酮形成稳定的配合物,导致其紫外吸收曲线发生较大变化,实验结果说明:SFP对酪氨酸酶有显著的抑制作用,抑制类型为可逆的混合型抑制。同时,SFP通过清除自由基和螯合金属离子达到抑制酪氨酸酶活性的效果。4研究红花黄酮对鲜切苹果片的保鲜。以不同浓度的SFE、SFP处理鲜切苹果片,考察对苹果片褐变度、TSS含量和VC含量的影响。结果表明:1mg/mL的SFE,浸泡2min后,苹果切片的褐变度为4.44,TSS含量为10.5%,VC含量为0.017mg/100g。研究说明,红花黄酮对苹果片具有保鲜作用。5 SFP经过Sephadex LH-20初步分离,对比高效液相色谱图和紫外吸收光谱,可以确定收集的组分中的黄酮类化合物为羟基红花黄色素A和芦丁。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 红花概述
• 1.2 酪氨酸酶抑制剂的概述
• 1.2.1 酪氨酸酶的概述
• 1.2.2 酪氨酸酶抑制剂的研究概况
• 1.2.3 酪氨酸酶抑制剂的来源
• 1.2.4 酪氨酸酶抑制剂的制备方法
• 1.2.5 酪氨酸酶抑制剂的作用机理
• 1.3 本课题研究的目的和内容
• 1.3.1 酪氨酸酶抑制剂的提取
• 1.3.2 酪氨酸酶抑制剂的纯化
• 1.3.3 酪氨酸酶抑制剂抑制效果的研究
• 1.3.4 酪氨酸酶抑制机理的初步研究
• 1.3.5 酪氨酸酶抑制剂的应用
• 1.3.6 酪氨酸酶抑制剂稳定性的研究及组分分析
• 第二章 微波提取红花黄酮类化合物的研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料及主要试剂
• 2.1.2 主要实验仪器
• 2.1.3 红花黄酮测定方法的建立
• 2.1.4 红花黄酮的微波提取实验
• 2.1.5 测定指标及数据处理
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 红花黄酮含量测定方法的确定
• 2.2.2 标准曲线的绘制
• 2.2.3 单因素对微波提取效果的影响
• 2.2.4 正交优化提取工艺
• 2.2.5 浸提次数
• 2.3 结论
• 第三章 大孔吸附树脂分离纯化红花总黄酮的研究
• 3.1 实验材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 仪器
• 3.1.3 实验方法
• 3.2 实验结果与讨论
• 3.2.1 大孔树脂对红花总黄酮的静态吸附和解吸效果
• 3.2.2 大孔树脂对红花总黄酮的动态吸附和解吸效果
• 3.3 结论
• 第四章 红花黄酮对酪氨酸酶的抑制及其机理研究
• 4.1 实验材料与方法
• 4.1.1 材料及试剂
• 4.1.2 主要实验仪器
• 4.1.3 实验方法
• 4.2 实验结果与讨论
• 4.2.1 红花黄酮对酪氨酸酶活力的影响
• 4.2.2 抑制机理的研究
• 4.2.3 红花黄酮对酪氨酸酶的抑制作用
• 4.3 结论
• 第五章 红花黄酮对鲜切苹果的保鲜的研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 试剂
• 5.1.3 仪器
• 5.1.4 实验方法
• 5.2 实验结果与讨论
• 5.2.1 处理时间对鲜切苹果保鲜效果的影响
• 5.2.2 不同浓度SFP对鲜切苹果保鲜效果的影响
• 5.2.3 不同浓度SFE对鲜切苹果保鲜效果的影响
• 5.3 结论
• 第六章 红花黄酮的组分鉴定及稳定性研究
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 材料
• 6.1.2 试剂
• 6.1.3 仪器
• 6.1.4 实验方法
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 对SFP初步分离
• 6.2.2 HPLC分离分析
• 6.2.3 稳定性研究
• 6.3 结论
• 参考文献
• 科研情况说明及学位论文使用授权声明
• 致谢