大白菜软腐病细菌Pel基因SNP与致病力关系分析

大白菜软腐病细菌Pel基因SNP与致病力关系分析

论文摘要

大白菜(Brassica campestris L.ssp.pekinensis)起源于我国,是十字花科中重要的蔬菜作物之一。胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜亚种(Erwinia.carotovora.subsp.carotovora)(Ecc)是软腐病致病菌种群中最主要的致病亚种,其在许多重要经济作物上可导致软腐病、茎腐病和黑茎病,有很广泛的寄主范围,是大白菜软腐病的重要致病菌。大白菜品种不同,对软腐病的抗病性也不一样,现在我国对于大白菜软腐病种群的鉴定和遗传种群划分已有初步的研究,但对其致病相关基因的研究还很少,本文通过常规分离方法鉴定、16s rDNA鉴定,分离得到15个Ecc菌株;根据NCBI上公布的Pe1A、Pe1B的序列设计引物,从大白菜软腐病细菌中克隆Pe1A、Pe1B部分序列,,并进行SNP分析;进行序列变异与果胶酶活性和菌株致病力的关联分析,取得如下结论:1、分离的到的15个Ecc菌株经致病力测定划分为4个致病型,Ⅰ型有Ecc1,Ecc2,Ecc6;Ⅱ型有 Ecc9,Ecc10,Ecc11,Ecc13,Ecc15;Ⅲ型有Ecc4,Ecc5,Ecc8,Ecc12,Ecc14,Ⅳ型有Ecc7。2、Pe1A在15个分离的到的Ecc菌中存在29处等位变异,其中包括18处SNP和11处InDe1。Pe1B在15个菌株中存在23处等位变异,包括19个SNP和4个InDe1。3、利用DPS数据处理系统对15个Ecc菌株在感病寄主A-78的病情指数与果胶酶活性进行相关性分析表明,二者呈极显著相关,相关系数为r=0.91**(**p<0.01);对15个菌株的致病力类型与果胶酶活性进行相关性分析表明,二者呈极显著相关,在r=0.96**(**p<0.01)。4、15个Ecc菌株的果胶酶活性与Pe1A基因在1bp处的inde1(G)呈显著相关,r=0.60*(*p<0.05):与 6bp 处的 indel(T).呈极显著相关,r=-0.78**(**p<0.01);与 471bp处的A-G呈显著相关,r=0.65*(*p<0.05)。与Pe1B基因SNP在7bp处的A-G,11bp处的Inde1(A),1087bp 处的 T-A 均呈显著相关,相关系数 r=0.65*(*p<0.05)。5、15个Ecc菌株在感病寄主A-78的病情指数与Pe1A在6bp处的inde1(T)呈极显著相关,相关系数r=-0.72**(**p<0.01)。15个Ecc菌株的致病力类型与Pe1A在在1bp处的inde1(G),6bp处的inde1(T)均呈显著相关,相关系数分别为r=0.61*、r=-0.63*(*p<0.05)。6、15个Ecc菌株在感病寄主A-78的病情指数和致病力类型与Pe1B基因SNP进行相关性分析表明,二者相关性不显著。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 1 前言
  • 1.1 研究的目的与意义
  • 1.2 文献综述
  • 1.2.1 大白菜软腐病
  • 1.2.2 16s rDNA基因在细菌遗传多样性中的应用
  • 1.2.3 单核苷酸多态性的研究进展
  • 1.2.4 软腐欧文氏菌中致病相关的酶
  • 1.3 本文主要研究内容
  • 2 材料与方法
  • 2.1 试验材料
  • 2.1.1 材料
  • 2.1.2 主要分子生物学及生化试剂
  • 2.1.3 试验仪器
  • 2.1.4 菌种及质粒
  • 2.1.5 主要软件
  • 2.2 试验方法
  • 2.2.1 大白菜软腐病细菌的分离、鉴定
  • 2.2.2 大白菜软腐病细菌致病力测定
  • 2.2.3 大白菜软腐病细菌果胶酶活性测定
  • 2.2.4 Pel的SNP分析及其与酶活性相关分析
  • 2.2.5 大白菜软腐病细菌致病力与果胶酶活性和SNP的相关分析
  • 3 结果与分析
  • 3.1 大白菜软腐病细菌的分离鉴定
  • 3.1.1 大白菜软腐病细菌的常规鉴定
  • 3.1.2 大白菜软腐病细菌16s rDNA基因的克隆和序列分析
  • 3.2 大白菜软腐病细菌的致病力测定
  • 3.2.1 软腐欧文氏菌的发病情况调查结果分析
  • 3.2.2 致病型划分分析
  • 3.3 大白菜软腐病细菌的果胶酶活性测定
  • 3.4 Pel的SNP分析及与果胶酶活性相关分析
  • 3.4.1 PelA的SNP分析及与果胶酶活性相关分析
  • 3.4.2 PelB的SNP分析及与果胶酶活性相关分析
  • 3.5 大白菜软腐病细菌致病力与果胶酶活性、Pel基因SNP的相关分析
  • 3.5.1 大白菜软腐病细菌的致病力与酶活性的相关性分析
  • 3.5.2 大白菜软腐病细菌的致病力与Pel基因SNP的相关分析
  • 4 讨论
  • 4.1 大白菜软腐病细菌的常规鉴定
  • 4.2 大白菜软腐病细菌16s rDNA基因的克隆
  • 4.3 大白菜软腐病致病力的测定
  • 4.4 Pel的SNP分析及与果胶酶活性相关分析
  • 4.4.1 PelA基因的SNP分析及与果胶酶活性相关性分析
  • 4.4.2 PelB基因的SNP分析及与果胶酶活性相关性分析
  • 4.5 软腐病细菌的致病力与酶活性,基因SNP的相关性分析
  • 4.5.1 软腐病细菌的致病力和酶活性的相关性分析
  • 4.5.2 软腐病细菌的致病力和基因SNP的相关性分析
  • 4.6 本研究的创新点与不足
  • 5 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附录
  • 攻读硕士期间发表学术论文
  • 相关论文文献

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