促红细胞生成素对大鼠脑缺血损伤保护作用的研究

论文摘要

目的:本实验通过Longa颈外动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,用促红细胞生成素预处理后,观察脑组织病理变化,梗死体积,大鼠学习记忆能力测试以及HSP27、VEGF的表达,探讨EPO对大鼠脑缺血损伤所产生的保护作用以及产生这种保护作用的可能机制。方法:1选用健康成年雄性SD大鼠（Sprague-Dawley Rat）54只随机分为3组:假手术组,缺血缺氧组,缺血缺氧组+EPO预处理组,每组又分为12h、24h、48h三个时间点比较热休克蛋白27（heat shock proteins ,HSP27）和血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial growth factor ,VEGF）在缺血再灌注不同时期的表达变化,另设正常对照组6只。分别在缺血再灌注12h、24h、48h时断头取脑,正常组大鼠不手术直接处死取脑。石蜡切片行HE染色以及免疫组化染色。2另选用健康成年雄性SD大鼠24只随机分为4组:正常对照组,假手术组,缺血缺氧组,缺血缺氧组+EPO预处理组,每组6只。在缺血再灌注24 h后行大鼠学习记忆能力测试以及10%红四氮氯唑（TTC染色）染色。结果:1 HE染色:缺血再灌注组中神经元稀疏,细胞间隙增大,并可见大量神经细胞变性坏死,表现为胞体皱缩,核固缩深染,核仁消失;EPO组神经细胞存活数量增多,损伤程度明显减轻;假手术组皮层神经细胞结构基本正常,仅见个别细胞体积缩小,核深染.2免疫组化染色:脑组织中HSP27的表达:正常组和假手术组神经细胞胞浆和胞核中均可见少量淡黄色颗粒;缺血再灌注组与EPO预处理组中神经细胞胞浆和胞核中棕黄色颗粒增多。在缺血再灌注12 h时,EPO组阳性细胞的表达低于缺血再灌注组,两者比较有统计学意义（P<0.01）;而在缺血再灌注24 h、48 h时,EPO预处理组中神经细胞胞浆和胞核中棕黄色颗粒比缺血再灌注组显著增多,两者比较有显著性统计学差异（P<0.01）;与正常组和假手术组相比,在缺血再灌注12 h、24 h、48 h时,两组均有统计学意义（P<0.01 ）;正常组和假手术组相比,无统计学意义（P>0.05）.脑组织中VEGF的表达:正常组和假手术组细胞质中可见少量棕黄色颗粒,缺血再灌注组与EPO预处理组神经细胞胞质中棕黄色颗粒明显增多。在缺血再灌注12h、24h、48h时,EPO预处理组中神经细胞胞质棕黄色颗粒均比缺血再灌注组增多,两者比较有显著性统计学差异（P<0.01）;与正常组和假手术组相比,在缺血再灌注12 h、24 h、48 h时,两组均有显著性统计学差异（P<0.01）;正常组和假手术组相比,无统计学意义（P>0.05）.3梗死体积:脑组织切片TTC染色可见有白色梗死灶形成,缺血再灌注组梗死体积占全脑体积的百分比为（22.38±4.34）%,EPO治疗组为（11.29±2.78）%。两组相比,EPO治疗组脑梗死体积明显减小（P<0.01）,假手术组未见脑梗死灶。4大鼠学习记忆能力测试统计分析:1)与假手术组、正常对照组比较,缺血再灌注组尝试次数明显增多（P< 0.01）;与缺血再灌注组比较,EPO治疗组尝试次数明显减少,有显著性差异（P<0.01）;假手术组、正常对照组两组比较,无统计学意义（P>0.05 ）。2)与假手术组、正常对照组比较,缺血再灌注组测试10次时间明显延长,正确次数降低,有显著性差异（P<0.01）;与缺血再灌注组比较,EPO治疗组测试10次时间减少,正确次数增多,有显著性差异（P<0.01）;假手术组、正常对照组两组比较,无统计学意义（P>0.05 ）。结论:1 EPO预处理后对脑缺血再灌注损伤可以产生保护作用,其保护作用可能与促进缺血侧HSP27、VEGF的表达有关。2 HSP27可能同时参与了细胞凋亡的促进和抑制过程,在早期主要是促进细胞凋亡,然后才发挥抑制细胞凋亡的作用。3 EPO预处理后可以促进大鼠学习和记忆功能的恢复。

论文目录

• 中英文缩写词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文
• 前言
• 第一章 材料和方法
• 第二章 结果
• 第三章 讨论
• 第四章 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 致谢