论文摘要
目的①分析乙肝相关终末期肝病肝移植术后FK506的浓度与T淋巴细胞亚群之间的关系;②外周血单个核细胞（PBMC）中的HBV DNA含量与T淋巴细胞亚群的水平之间的相关性。初步探讨其三者之间的相互关系,对肝移植术后使用FK506个体化方案预防乙肝复发提供理论依据。方法用荧光标记单克隆抗体结合流式细胞技术检测健康对照组（20例）、慢性乙型肝炎对照组（20例）、乙肝相关终末期肝病肝移植FK506治疗组（23例）术后4、8、12、16周的外周血T细胞亚群:CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD8+CD152+的百分比。用实时荧光定量PCR检测乙肝相关终末期肝病肝移植后4、8、12、16周PBMC内的HBV DNA。肝移植FK506治疗组在术后第4、8、12、16周检测FK506的浓度,并据此分别称为FK506治疗4周组、FK506治疗8周组、FK506治疗12周组、FK506治疗16周组并把每组分为FK506高浓度组和FK506低浓度组。实验结果采用SPSS13.0分析软件进行统计分析处理。对正态分布数据,两组数据间的比较采用t检验进行分析比较,多组数据间比较采用单因素方差分析,用Tamhane检验进行组间两两比较;非正态分布数据采用Kruskal Wallis Test进行多组间比较,以P<0.05描述统计有显著差异。肝移植术后T细胞亚群与PBMC内的HBV DNA的关系采用多元线性回归分析。结果①、肝移植术后FK506治疗组的CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD8+CD28+的百分比计数及CD8+CD28+/ CD8+CD28-的比值比健康对照组比较均明显下降而CD8+CD28-、CD8+CD152+的百分比计数则显著升高（P<0.05）,均有统计学意义。FK506治疗组的CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD8+CD28+的百分比计数及CD8+CD28+/CD8+CD28-的比值与慢性乙型肝炎对照组比较均明显下降而CD8+CD152+的百分比计数则明显升高（P<0.05）,均有统计学意义。肝移植术后FK506浓度随时间的延长而逐渐减低,其中4周和12、16周,8周和16周,12周和16周组间FK506浓度差别有统计学意义（P<0.05）;肝移植术后CD8+CD28+、CD8+CD28+/ CD8+CD28-的比值随FK506浓度的降低而逐渐回升,而CD8+CD28-、CD8+CD152+则相反,其中术后4周和12、16周组间的CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD8+CD152+的百分比及CD8+CD28+/ CD8+CD28-的比值变化有统计学意义（P<0.05）。肝移植术后4、8、12周组内的FK506高浓度组（≥9ng/ml）的CD3+CD4+、CD8+CD28+、CD8+CD28+/ CD8+CD28-比值均明显低于低浓度组（<9ng/ml）有统计学意义,其P值均<0.05;而CD8+CD152+则明显高于低浓度组。在术后4、8周组内的高浓度组CD8+CD28-明显高于低浓度组（P <0.05）。②、肝移植术后4、8、12周组内的FK506高浓度组的PBMC内的HBV DNA均明显高于低浓度组,有统计学意义（P < 0.05）。③、用多元线性回归分析PBMC内的HBV DNA与CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD8+CD152+的相关性,我们发现CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD8+CD152+与HBV DNA密切相关,其决定系数为R2= 0.795,根据回归方程分析结果认为PBMC内的HBV DNA与CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD8+CD152+呈直线相关,其中与CD8+CD28-、CD8+CD152+呈正相关,与CD8+CD28+呈负相关。结论①FK506浓度变化对CD8+CD28+、CD8+CD28-及CD8+CD28+/CD8+CD28-比值的影响比CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞更为敏感。②FK506浓度对乙肝相关终末期肝病肝移植术后PBMC内的HBV DNA拷贝数有影响,肝移植术后乙肝复发的机制可能与FK506浓度有关。③FK506可能通过抑制CD3+CD4+、CD8+CD28+ ,上调CD8 +CD28–、CD8+CD152+的表达导致细胞免疫功能降低,对PBMC内的HBV的清除能力减弱。
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