VEGF小干扰RNA抑制兔角膜新生血管的实验研究

论文摘要

研究背景:血管内皮生长因子（Vascular endothelial growthfactor,VEGF）是角膜新生血管形成最主要的生长因子,研究VEGF在角膜新生血管形成中的致病机制,调控其表达将是防治角膜新生血管性疾病的有效途径。目的:本研究以兔角膜碱烧伤新生血管动物模型为研究对象,探讨VEGF小干扰RNA（VEGF siRNA）对碱烧伤后角膜组织中VEGFmRNA和蛋白质表达的影响,进而评价其在治疗角膜新生血管疾病中的作用。方法:本研究分三部分进行。第一部分:取普通家兔25只,采用碱烧伤方法（1mol/L NaOH溶液）诱导角膜新生血管模型,碱烧伤后不同时间（1、3、5、7、14d）采用形态学方法观察角膜新生血管的生长情况,免疫组织化学方法检测角膜VEGF的表达。第二部分:25只普通家兔双眼角膜碱烧伤后（1mol/L NaOH溶液）立即以脂质体（LF2000）为载体,右眼球结膜下注射VEGFsiRNA重组质粒,左眼球结膜下注射pSilencer 2.1-U6 hygro空白质粒作为对照。碱烧伤后1、3、5、7、14 d,形态学分析评价角膜新生血管的生长情况。第三部分:在完成角膜形态学分析后,分别于碱烧伤后1、3、5、7、14d,采用RT-PCR方法检测角膜组织中VEGF mRNA的表达,免疫组织化学法检测角膜组织中VEGF蛋白质的表达。结果:第一部分:角膜碱烧伤后24hVEGF的表达开始升高,伤后5d达高峰,伤后7dVEGF的表达开始下降,14d后显著下降。碱烧伤后,角膜新生血管与VEGF的表达呈明显的平行关系。第二部分:与对照眼相比,碱烧伤后球结膜下注射VEGFsiRNA重组质粒,实验眼在各时间段,CNV长度明显变短,面积明显变小,差异有统计学意义（p＜0.05）。第三部分:与对照眼相比较,实验组在各时间段RT-PCR结果显示角膜组织中VEGF mRNA的表达明显下调,免疫组织化学结果显示角膜组织中VEGF蛋白质的表达明显下调,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:碱烧伤后兔角膜VEGF的表达水平与新生血管的形成有相关性,并在其中发挥了重要作用。VEGFsiRNA能有效地抑制碱烧伤后角膜组织中VEGF mRNA及蛋白质的表达,从而抑制角膜新生血管的形成。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 中英文对照
• 前言
• 第一章 兔角膜碱烧伤后VEGF的表达与新生血管的关系
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 主要试剂与仪器设备
• 1.1.2 实验方法
• 1.2 结果
• 1.2.1 角膜新生血管的形态学特征
• 1.2.2 角膜 VEGF蛋白质的表达差异
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 第二章 VEGF siRNA对兔眼碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 主要试剂和仪器设备
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.3 统计分析
• 2.2 结果
• 2.2.1 角膜新生血管的形态学变化
• 2.2.2 角膜新生血管的测量与比较
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第三章 VEGF siRNA对兔眼碱烧伤后角膜VEGF表达的调控作用
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 主要试剂与仪器设备
• 3.1.2 实验方法
• 3.1.3 统计分析
• 3.2 结果
• 3.2.1 角膜VEGFmRNA的表达
• 3.2.2 角膜VEGF蛋白质的表达
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间的主要研究成果