PPARs、NF-κB和SOD在梗阻性黄疸大鼠肝脏中表达及意义

论文摘要

目的:梗阻性黄疸（以下简称梗黄）,是由于各种原因造成胆汁无法通过正常途径排泄入肠道,大量胆汁淤积于肝脏,同时破坏胆道结构,使胆汁逆流入血,从而对机体造成严重损害的症侯群。梗黄时肝脏成为最先受损的器官,并最终导致心、脑、肾等重要器官功能不全及多器官功能衰竭（multiple organ failure, MOF）。梗黄脏器损害的分子机制现已成为研究的热点。本课题组既往实验证实:脂质过氧化是梗黄脏器损害的重要机制之一,抗过氧化关键酶——超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）,在梗黄肝脏损害时合成明显减少,而炎性细胞因子肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）则明显升高,且两者呈负相关。基于上述结论,我们考虑:是否存在上游的调控因子,调控二者的表达?是否可以寻找到新的基因靶点,从而为梗黄肝脏损害的保护开辟新的途径?过氧化体增殖剂激活受体（ peroxisome proliferators-activated receptors, PPARs）是由Issemann和Green发现的一类核激素受体超家族成员,其通过与靶基因结合,在转录水平对脂肪的代谢、细胞增殖分化、炎症反应、抗脂质过氧化损伤等生理和病理过程进行调节。核因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）做为一种重要的炎症前基因的转录调控因子,对炎性反应、氧化应激的发生起着重要作用。本实验通过结扎离断大鼠胆总管,构建梗黄大鼠模型,检测PPARs、NF-κB和SOD在肝脏中的表达,明确它们与梗黄时肝脏损害的关系及意义,为进一步阐明梗黄时肝脏损害的分子机制,寻找对抗该损害新的治疗途径奠定基础。方法:选取成年雄性SD大鼠120只,随机分为四组:假手术（sham）7天组、胆道结扎（bile duct ligation, BDL）7天组、假手术19天组和胆道结扎19天组,每组30只。结扎并离断胆总管构建梗黄大鼠模型。各组大鼠分别于第7天和第19天处死,检测血清中总胆红素（total bilirubin, TB）、直接胆红素（direct bilirubin, DB）和谷丙转氨酶（alanine aminotransferase, ALT） ,肝脏组织行HE病理切片检查明确黄疸及肝损伤情况。肝脏组织匀浆后应用SOD测定试剂盒检测肝脏组织中总SOD和CuZn-SOD活力。通过RT-PCR方法,以β-actin为内参,检测PPARs在肝脏中的mRNA水平。同时采用免疫组织化学方法检测PPARs及NF-κB在肝脏中的表达。结果:胆道结扎组与假手术组相比,血清中TB、DB及ALT明显增高（P<0.01）。HE染色切片上观察到肝脏组织明显损伤,肝细胞肿胀、坏死、炎症反应、纤维化等,这些改变19天组较7天组更明显;肝组织中总SOD和CuZn-SOD活力胆道结扎组较假手术组明显减低（P<0.01）,19天组较7天组减低更加明显。RT-PCR法检测PPARs在肝脏中的mRNA表达水平显示,除7天组的PPARβ外,胆道结扎组PPARs表达较对照组明显下调（P<0.01）,且19天组较7天组显著。免疫组化结果显示胆道结扎组与假手术组相比, PPARs在肝脏组织表达明显下降（P<0.01）。NF-κBp65蛋白在假手术组肝组织几乎未见表达,而在胆道结扎组激活并出现核移位,且19天组较7天组更加显著。胆道结扎组大鼠肝脏总SOD活力与PPARs蛋白表达呈显著正相关（P<0.01）,而NF-κBp65蛋白表达与PPARs蛋白表达呈显著负相关（P<0.01）。结论:梗黄大鼠肝脏中,PPARs在基因水平和蛋白水平均受到抑制,且随梗阻时间延长而加重。PPARs可能为SOD及NF-κB的上游关键调控因子,在梗黄肝脏对SOD正性调节表达作用减弱,下调SOD表达,并通过对NF-κB的负性调节作用减弱,加重脂质过氧化损伤及炎性反应,导致梗黄时肝脏损害的发生。这可能是梗黄肝脏损害的主要分子调节机制之一。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 展望
• （九） 参考文献
• （十） 附图
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢