透骨消痛颗粒含药血清诱导BMSCs向软骨细胞分化的实验研究

论文摘要

目的通过透骨消痛颗粒对骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外抽取、分离、纯化、培养、增殖、软骨分化等基础实验,以优化软骨组织工程的种子细胞,增强软骨的自我修复功能,延缓软骨的退行性改变,达到预防与治疗骨性关节炎（OA）的目的,为中医药治疗OA提供坚实的临床基础。方法（1）抽取SD大鼠骨髓液,采用全骨髓贴壁培养法经体外分离、纯化、培养获得SD大鼠BMSCs,通过倒置相差显微镜观察其生长情况,研究BMSCs的体外生长状况。（2）取4周龄SD大鼠72只,随机分为3组,即:水提物组（48只）、醇提物组（16只）和空白对照组（8只）,再将水提物组随机分为3个亚组,即:高剂量组、中剂量（等效量）组、低剂量组,每个亚组16只。给予相对应的给药量灌胃3d,末次给药分别在1小时、2小时后进行采血,制备透骨消痛颗粒含药血清,运用透骨消痛颗粒不同含药血清浓度对获得的BMSCs进行药物干预72h,通过MTT法研究透骨消痛颗粒对BMSCs增殖的影响。（3）将第2代SD大鼠BMSCs分为空白对照组、单纯软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒含药血清加软骨诱导剂组,采用原培养液、软骨诱导培养液(TGF-β310ug/L,Dex10-7mol/L,VitC50mg/L)及透骨消痛颗粒含药血清的软骨诱导培养液,50ml细胞培养瓶内进行培养,1、2、3周后通过倒置相差显微镜及免疫细胞化学染色等实验技术,研究透骨消痛颗粒对BMSCs诱导成软骨细胞的影响。（4）数据统计与分析:数据以均数±标准差表示,用统计软件SPSS14.0进行统计分析。结果（1）体外培养的BMSCs生长状况良好,12d可获得均质性较好的BMSCs,实验证明全骨髓贴壁培养法是分离BMSCs的一种比较理想的方法,BMSCs体外分离培养成功。（2）透骨消痛颗粒含药血清各实验组均可以促进BMSCs增殖,且各组与空白对照组相比均有非常显著性差异（P＜0.01）;在中剂量药物浓度时达到最大效应（P＜0.01）,继续增加浓度则使OD值呈现下降趋势;中剂量1小时组与2小时组相比无显著性差异（P＞0.05）。实验说明:透骨消痛颗粒刺激BMSCs增殖与药物浓度有关,水提物中剂量组的促增殖作用效应最大。（3）在TGF-β3等诱导下,软骨表型化BMSCs彼此融合,聚集生长,向三角形、多边形转变。透骨消痛颗粒组、软骨诱导剂组均有Ⅱ型胶原表达,而且透骨消痛颗粒组比软骨诱导剂组表达强,空白对照组没有Ⅱ型胶原表达。实验结果证明:透骨消痛颗粒可以有效的促进Ⅱ型胶原表达。结论（1）通过体外对SD大鼠BMSCs的抽取、分离、纯化、培养与增殖,已经建立起比较完整的BMSCs体外培养体系。（2）透骨消痛颗粒促进BMSCs增殖的同时,在诱导BMSCs向软骨细胞分化有显著的促进作用,从而增加软骨细胞的数量。（3）透骨消痛颗粒可以促进BMSCs向软骨细胞转化,优化骨组织工程的种子细胞体系,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退变过程。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 BMSCs的体外分离培养与鉴定的实验研究
• 1 研究目的
• 2 实验材料
• 3 实验方法与步骤
• 4 结果
• 5 讨论
• 6 小结
• 7 参考文献
• 第二部分 透骨消痛颗粒含药血清对体外培养BMSCs增殖的实验研究
• 1 研究目的
• 2 实验材料
• 3 实验方法与步骤
• 4 结果
• 5 讨论
• 6 小结
• 7 参考文献
• 第三部分 透骨消痛颗粒含药血清对体外培养的BMSCs向软骨细胞分化的实验研究
• 1 研究目的
• 2 实验材料
• 3 实验方法与步骤
• 4 结果
• 5 讨论
• 6 小结
• 7 参考文献
• 第四部分 结论与展望
• 致谢
• 文献综述
• 作者简历