口蹄疫—伪狂犬病二价与口蹄疫—猪细小—伪狂犬病三价基因工程疫苗的研究

论文题目: 口蹄疫—伪狂犬病二价与口蹄疫—猪细小—伪狂犬病三价基因工程疫苗的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 动物遗传育种与繁殖

作者: 洪琦

导师: 陈焕春,熊远著

关键词: 口蹄疫病毒,伪狂犬病病毒,猪细小病毒,重组伪狂犬病病毒,基因工程疫苗

文献来源: 华中农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 口蹄疫、猪细小病毒病与伪狂犬病是危害全球养猪业的三种重要传染病,分别由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)、猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)引起。当前猪细小病毒病和伪狂犬病等猪繁殖障碍性传染病在我国很多猪场流行,造成大量死胎、流产及猪生产能力下降,危害严重。口蹄疫则是人畜共患的急性、烈性传染病,由于其传染性极强,而传统灭活疫苗在生产使用过程中有灭活不彻底导致病毒逃逸工厂而发生口蹄疫的风险,因此口蹄疫基因工程疫苗的研究受到高度重视。 伪狂犬病病毒具有不感染人、基因组容量大、重组病毒遗传稳定等特点,适合改造成表达外源基因的活病毒表达载体,以伪狂犬病病毒基因缺失株为表达载体构建基因工程疫苗,将其它病原的保护性抗原基因插入PRV基因缺失疫苗株中,就可构建成二价或多价基因工程疫苗,从而在猪场疫病免疫中起到一针防多病的作用。 1.口蹄疫与伪狂犬病二价基因工程疫苗的研究 将口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因共同插入到重组载体pIECMV中,构建重组伪狂犬病病毒转移载体pIEP1-2A-3C。采用脂质体介导法将pIEP1-2A-3C与伪狂犬病病毒基因缺失标志疫苗株PRV TK~-/gE~-/LacZ~+基因组共转染,构建了表达口蹄疫病毒P1-2A和3C基因的重组伪狂犬病病毒TK/gE~-/P1-2A-3C,并用空斑筛选与PCR鉴定的方法纯化重组病毒。进行Western blot鉴定和测定重组病毒在不同细胞上的增殖滴度,结果表明重组病毒构建正确且外源基因获得有效表达,其增殖滴度与亲本株相比差异不明显。遗传稳定性和安全性检测表明重组病毒稳定性、安全性良好,重组病毒免疫BALB/c小鼠后用ELISA检测血清中FMDV抗体,并测定FMDV中和抗体效价,结果表明重组病毒可诱导小鼠产生明显的免疫反应,从而为伪狂犬病与口蹄疫二价基因工程疫苗的研制应用打下基础。 2.口蹄疫—猪细小—伪狂犬病三价基因工程疫苗的研究 将口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和猪细小病毒VP2基因共同插入到重组载体pIECMV中,构建重组伪狂犬病病毒转移载体pIEPI-2A-VP2,经PCR和酶切鉴定证实质粒构建正确且两个表达框为反向插入。采用脂质体介导法将pIEP1-2A-VP2与伪狂犬病病毒基因缺失标志疫苗株PRV TK~-/gE~-/LacZ~+基因组共转染,构建了共表达口蹄疫病毒P1-2A基因和细小病毒VP2基因的重组伪狂犬病病毒PRV TK~-/gE~-/P1-2A-VP2,并

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中文摘要

Abstract

第1章 文献综述

1.1 口蹄疫病毒的研究进展

1.1.1 口蹄疫的危害与研究回顾

1.1.2 口蹄疫病毒的结构与分子生物学

1.1.3 口蹄疫流行病学与诊断

1.1.4 口蹄疫病毒的免疫与疫苗研究进展

1.2 伪狂犬病病毒的研究进展

1.2.1 伪狂犬病的危害与特性

1.2.2 伪狂犬病病毒的分子生物学

1.2.3 伪狂犬病病毒基因缺失疫苗的研究进展

1.2.4 伪狂犬病根除计划及其血清学诊断

1.3 猪细小病毒的研究进展

1.3.1 猪细小病毒的危害与特性

1.3.2 猪细小病毒病的流行病学

1.3.3 猪细小病毒的分子生物学

1.3.4 猪细小病毒的免疫与疫苗研究进展

1.4 病毒活载体基因工程疫苗的研究进展

1.4.1 病毒活载体疫苗的研究概述

1.4.2 伪狂犬病病毒活载体疫苗的研究进展

第2章 口蹄疫—伪狂犬病二价基因工程疫苗的研究

2.1 研究目的和意义

2.2 材料与方法

2.2.1 实验材料

2.2.2 实验方法

2.3 结果与分析

2.3.1 载体pIECMVP1-2A-3C的构建

2.3.2 重组病毒PRV TK~-／gE~-／P1-2A-3C的构建与筛选

2.3.3 重组病毒的Western blot鉴定

2.3.4 重组病毒的增殖滴度测定

2.3.5 重组病毒的稳定性检测

2.3.6 重组病毒的小鼠动物试验

2.4 讨论

2.4.1 伪狂犬病病毒载体的选择

2.4.2 重组伪狂犬病病毒的构建

2.4.3 外源基因在伪狂犬病病毒载体中的表达

2.4.4 外源基因的插入对伪狂犬病病毒增殖和毒力的影响

2.4.5 重组病毒诱导的体液免疫应答

2.4.6 口蹄疫—伪狂犬二价基因工程疫苗的研制与应用

第3章 口蹄疫—猪细小—伪狂犬病三价基因工程疫苗的研究

3.1 研究目的和意义

3.2 材料与方法

3.2.1 实验材料

3.2.2 实验方法

3.3 结果与分析

3.3.1 载体pIEP1-2A-VP2的构建

3.3.2 重组病毒PRV TK／gE~-／P1-2A-VP2的构建与筛选

3.3.3 重组病毒表达外源蛋白的Western blot检测

3.3.4 重组病毒的增殖滴度测定

3.3.5 重组病毒的小鼠动物试验

3.4 讨论

3.4.1 三价重组伪狂犬病病毒的构建

3.4.2 重组病毒PRV TK~-／gE~-／P1-2A-VP2的生物学特性

第4章 总结与展望

4.1 总结

4.2 展望

参考文献

缩略词表

致谢

发布时间: 2005-12-05

参考文献

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• [4].抗A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒重组双价多肽疫苗研究[D]. 易建中.复旦大学2005
• [5].猪瘟和口蹄疫病毒抗原基因在植物内的重组与表达[D]. 赫冬梅.浙江大学2005
• [6].O型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白疫苗的功能研究[D]. 冉波.吉林大学2006
• [7].RNAi抑制口蹄疫病毒复制与感染的相关研究[D]. 陈维灶.复旦大学2006
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