冠心病患者血浆中血管过氧化物酶水平变化与血管炎症反应研究

论文摘要

研究目的:本实验旨在观察冠心病患者血浆中血管过氧化物酶（VPO）的变化,在内皮细胞中初步探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导VPO参与血管炎症反应的作用机制。方法:本研究分为临床研究和细胞实验,临床研究共纳入139名冠心病（CAD）患者及47名健康体检者,所有研究对象分为三组,急性冠脉综合征组（ACS）72名,稳定型心绞痛组（SAP）67名和正常对照组（Control）47名。采用酶联免疫吸附法（ELISA）法检测血浆中TNF-α和髓过氧化物酶（MPO）水平;采用Western-Blot检测血浆中VPO和MPO的表达。细胞研究:培养内皮细胞,采用Western-Blot检测内皮细胞的VPO表达,采用荧光法检测细胞内ROS水平,采用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α水平。数据以均数±标准差（（?）±S.E.M.）表示,采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。两组比较用t检验,多组间比较采用ANOVA方差分析进行检验。双侧P＜0.05判断为有统计学差异。结果:1.ACS和SAP患者血浆中TNF-α、VPO水平明显高于正常对照组（P＜0.01,P＜0.01）,且ACS组显著高于SAP组,两组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;ACS组患者血浆中MPO水平显著高于SAP组和正常对照组（P＜0.01）,SAP组患者血浆中MPO水平高于正常对照组,但两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）2.ox-LDL呈时间和浓度依赖性地升高内皮细胞培养上清液中TNF-α水平;ox-LDL（100 mg/L）呈时间依赖性地上调内皮细胞VPO表达,升高细胞内ROS水平。3.ox-LDL（100 mg/L,24 h）可促进内皮细胞VPO表达并升高细胞内ROS水平,预先给予细胞内抗氧化剂吡咯二硫代氨基甲酸乙酯（PDTC）（100μM）孵育细胞1 h后,加入ox-LDL（100 mg/L）孵育细胞24 h,可显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞VPO的表达及细胞内ROS水平的增加,单独给予PDTC（100μM）无上述作用。结论:1.冠心病患者血浆中VPO的表达显著增高;2.ox-LDL可上调内皮细胞表达VPO;3.ox-LDL促进内皮细胞分泌TNF-α,该作用可能与上调内皮细胞VPO表达,增加细胞内ROS水平有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词
• 1. 前言
• 2. 材料与方法
• 2.1 试剂和仪器
• 2.2 临床研究对象
• 2.3 血标本收集与检测
• 2.4 HUVEC-12细胞株及其生物学特征
• 2.5 人脐静脉血内皮细胞的培养
• 2.6 血浆蛋白质的定量
• 2.7 血浆中VPO蛋白的测定（Western-Blot法）
• 2.8 血浆中MPO蛋白的测定（Western-Blot法）
• 2.9 血浆中MPO含量检测（ELISA法）
• 2.10 人血浆LDL提取和LDL氧化
• 2.11 血浆中TNF-α含量检测（ELISA法）
• 2.12 实验设计和分组
• 2.13 统计学分析
• 3. 结果
• 3.1 ACS组、SAP组与正常对照组一般临床资料的比较
• 3.2 ACS组、SAP组与正常对照组VPO、MPO和TNF-α比较
• 3.3 ox-LDL对内皮细胞TNF-α表达的影响
• 3.4 ox-LDL对内皮细胞VPO表达及细胞内ROS水平的影响
• 3.5 PDTC对ox-LDL诱导内皮细胞VPO表达及细胞内ROS水平的影响
• 4. 附图
• 5. 讨论
• 6. 结论
• 7. 参考文献
• 8. 综述
• 9. 致谢
• 10. 攻读学位期间的研究成果