SARS冠状病毒M蛋白基因片段的克隆表达与表达产物单克隆抗体的制备和鉴定

论文摘要

严重急性呼吸道综合征（severe acute respiratory syndrome,SARS）是一种以发热和严重肺部感染为主要特征的新发急性传染病。2003年4月16日,WHO正式宣布:SARS的病原体是一种新型冠状病毒,并命名为SARS相关冠状病毒（SARS-CoV）。研究表明,SARS-CoV与人类普遍易感的冠状病毒OC43和229E株无抗体交叉反应,是一种新的从未在人类或动物中发现过的冠状病毒。本研究的目的是原核表达SARS-CoV S蛋白片段、M蛋白片段,分析其抗原性、免疫原性,并制备M蛋白片段特异性单克隆抗体（mAb）,为研制SARS的酶联免疫吸附试验（ELISA）诊断方法奠定基础。 1.SARS-CoV S蛋白、M蛋白编码基因片段的克隆、表达及其抗原性鉴定 化学合成SARS-CoV S蛋白氨基端501-base-pair（bp）、M蛋白氨基端129bp编码基因片段,通过基因重组构建原核表达质粒pGEX-6p-1+SARS-S、pGEX-6p-1+SARS-M。重组质粒经酶切鉴定及核苷酸序列测定后,转化感受态大肠杆菌BL21（DE3）。重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）证实,S融合蛋白、M融合蛋白均获得正确表达。免疫印迹试验（Western blot）证实:SARS恢复期血清中含有针对M蛋白片段的天然抗体,但没有针对S蛋白片段及谷胱甘肽-S-转移酶（GST）的天然抗体。利用Glutathione Sepharose 4B亲

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 SARS-CoV S蛋白、M蛋白基因片段的克隆、表达及其抗原性鉴定
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 分析与讨论
• 第二部分 SARS-CoV M蛋白片段单克隆抗体的制备与鉴定
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 分析与讨论
• 第三部分 SARS-CoV M蛋白片段B细胞抗原表位及其单克隆抗体识别位点的定位
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 分析与讨论
• 结语
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述及参考文献
• 论文独创性声明、论文使用授权声明