论文摘要
目的：构建稳定、高表达的Twist基因真核表达质粒载体,研究Twist基因在恶性肿瘤细胞侵袭中的作用及其机制。方法：①以质粒pcDNA4/myc-His A-Twist为模板采用PCR技术获取Twist基因全长编码框架,运用双酶切、定向克隆技术将目的片段亚克隆入质粒pTracer-CMV/BSD,构建质粒pTracer-CMV/BSD-Twist。②培养SW480结肠癌细胞株,运用Lipofectamine 2000转染SW480结肠癌细胞,实验分组：质粒pTracer-CMV/BSD-Twist组、质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组。③转染48小时后收获细胞,运用荧光实时定量PCR技术检测三组细胞Twist基因的mRNA表达水平；Wester blot技术检测三组细胞的Twist蛋白表达水平。④采用Transwell小室模型检测三组癌细胞的侵袭能力。结果：①经双酶切、基因测序等检测方法证实,本实验成功构建Twist基因真核表达质粒载体pTracer-CMV/BSD-Twist。②倒置荧光显微镜下观察转染48小室肿瘤细胞可见质粒pTracer-CMV/BSD-Twist组和质粒pTracer-CMV/BSD组表达绿色荧光蛋白的细胞,强度高而密集。③荧光实时定量PCR检测三组细胞Twist基因mRNA表达水平,结果显示质粒pTracer-CMV/BSD-Twist组Twist基因mRNA表达水平高于质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组,差异有统计学意义（P<0.01）,而质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组比较Twist基因mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。④Western blot检测三组细胞Twsit蛋白表达水平,结果显示质粒pTracer-CMV/BSD-Twist组Twist蛋白表达水平高于质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组,差异有统计学意义（P<0.01）,而质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组比较Twist蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。⑤Transwell小室模型检测三组细胞侵袭能力,结果显示质粒pTracer-CMV/BSD-Twist组细胞侵袭能力高于质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组,差异有统计学意义（P<0.01）,而质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组比较细胞侵袭能力差异无统计学意义（P>0.05）。结论：①成功构建Twist基因真核表达质粒载体pTracer-CMV/BSD-Twist,并证实转染肿瘤细胞后可表达Twist基因的mRNA和蛋白质。②Twist基因在恶性肿瘤细胞侵袭中发挥了重要的促进作用,Twist基因高表达可显著增强恶性肿瘤细胞的侵袭能力。
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- [7].TWIST和雌激素受体α在乳腺癌组织中的表达及对预后的影响[J]. 中国现代医学杂志 2015(21)
- [8].新年愿望清单[J]. 家居主张 2017(01)
- [9].Twist基因与乳腺癌关系的研究进展[J]. 川北医学院学报 2014(06)
- [10].TWIST基因及其在骨肉瘤中的研究进展[J]. 中华临床医师杂志(电子版) 2014(06)
- [11].Twist蛋白在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及临床意义[J]. 肿瘤学杂志 2013(02)
- [12].Twist蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及意义[J]. 肿瘤基础与临床 2011(05)
- [13].Twist和基质金属蛋白酶-2在乳腺浸润性导管癌组织中的表达分析[J]. 中国全科医学 2010(32)
- [14].Twist蛋白在胃癌中的表达及其临床意义[J]. 青岛医药卫生 2014(02)
- [15].乳腺浸润性微乳头状癌Twist表达临床意义研究[J]. 中华肿瘤防治杂志 2014(11)
- [16].Twist在肾细胞癌中表达及其临床意义研究[J]. 现代肿瘤医学 2013(10)
- [17].Twist基因与乳腺癌的发生和转移[J]. 现代诊断与治疗 2011(03)
- [18].Twist在宫颈鳞癌中的表达及其与临床生物学行为的关系[J]. 上海交通大学学报(医学版) 2011(05)
- [19].Energy calculation of Fe(001) twist grain boundary[J]. 商丘师范学院学报 2009(03)
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- [21].Twist在胃癌组织中的表达及其与浸润转移和预后的关系[J]. 中国初级卫生保健 2013(05)
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- [23].Twist和E-cadherin在子宫颈鳞癌中的表达及意义[J]. 河南外科学杂志 2012(06)
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- [27].Role of left ventricular twist mechanics in cardiomyopathies, dance of the helices[J]. World Journal of Cardiology 2015(08)
- [28].TWIST、HIF-1α、VEGF在胃癌中的表达及意义[J]. 中国免疫学杂志 2012(08)
- [29].TWIST转录因子在胃癌中的表达及临床意义[J]. 四川大学学报(医学版) 2011(05)
- [30].63例乳腺癌组织中Twist和VEGF的表达及相关性分析[J]. 重庆医学 2010(23)