赤芍801预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及可能分子机制研究

论文摘要

目的:探讨赤芍801预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及赤芍801对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的分子保护机制。方法:选择健康雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠,体重200-250g,由南昌大学医学院动物中心提供。35只健康大鼠所有大鼠先行适应性喂养一周后,随机分为5组,每组7只:A假手术组（sham operation,SO） ;B缺血30min组（30 minutes hepatic ischemia,I）;C缺血30min再灌注60min组（30 minutes hepatic ischemia followed by 60 minutes reperfusion ,IR）;D注射赤芍801预处理缺血30min组（I+PrG）;E注射赤芍801预处理缺血30min再灌注60min组（IR+PrG）。各组于缺血前30min,PrG预处理组静脉注射赤芍801注射液（PrG,40mg/kg）,模型组和假手术组静脉注射生理盐水2 ml。采用Yoshizumi法建立肝脏缺血再灌注损伤模型,即用乙醚麻醉大鼠后,取腹正中切口入腹,显露肝脏,血管夹住肝中叶和左外侧叶的肝动脉、门静脉,造成70%肝脏缺血模型,持续阻断30min后开放60min。假手术组仅行剖腹术及肝左、中叶肝蒂分离术,并不夹闭。查血清ALT水平,肝组织标本行HE染色,免疫组织化学检测HSP70蛋白、COX-2蛋白、BCL-2蛋白、ICAM-1蛋白表达水平, RT-PCR检测HSP70 mRNA、COX-2mRNA、BCL-2mRNA、ICAM-1mRNA的表达水平。结果:1.血清学检查:I组、IR组、I+PrG组、IR+PrG组的血清ALT水平与SO组相比较,显著升高（P<0.05）;IR组与I组及IR+PrG组与I+PrG组相比较,血清ALT显著升高（P<0.01）;I+PrG组与I组及IR+PrG与IR组相比较,血清ALT显著降低（P<0.01）,差异均有显著性。2. HE染色检查:SO组结构基本正常,肝细胞未见明显异常,肝小叶、中央静脉、汇管区结构清晰,肝细胞索排列整齐,偶见炎性细胞浸润;I组失去原有正常组织形态,肝细胞增大,胞浆着色变浅,呈水肿状,肝窦扩张,可见瘀血,窦索结构紊乱,伴少量炎症细胞浸润;IR组表现与I组表现类似,但可见中央静脉部分内皮剥脱及大量炎症细胞浸润;I+PrG组病理改变介于假手术组与I组之间;IR+PrG组的病理改变与IR组比较明显减轻。3.免疫组化检查:I组、IR组、I+PrG组、IR+PrG组HSP70蛋白, ICAM-1蛋白,BCL-2蛋白,COX-2蛋白表达与SO组相比均显著增强（P<0.05）,IR组与I组及IR+PrG组与I+PrG组HSP70蛋白, ICAM-1蛋白,BCL-2蛋白,COX-2蛋白表达相比较显著增强（P<0.05）;I+PrG与I组及IR+PrG组与IR组相比较, HSP70蛋白, BCL-2蛋白表达显著升高（P<0.05）, COX-2蛋白,ICAM-1蛋白表达显著降低（P<0.05）,差异均有显著性。4. RT-PCR检查:I组、IR组、I+PrG组、IR+PrG组HSP70mRNA, ICAM-1 mRNA,BCL-2 mRNA,COX-2 mRNA表达与SO组相比均显著增强（P<0.05）,IR组与I组及IR+PrG组与I+PrG组HSP70 mRNA, ICAM-1 mRNA,BCL-2 mRNA,COX-2 mRNA表达相比较显著增强（P<0.05）;I+PrG与I组及IR+PrG组与IR组相比较, HSP70 mRNA, BCL-2 mRNA表达显著升高（P<0.05）, COX-2 mRNA ,ICAM-1 mRNA表达显著降低（P<0.05）,差异均有显著性。结论:1.肝脏缺血后再灌注加重肝脏的损伤。2.肝脏缺血再灌注损伤后,肝功能出现损害,表现为ALT水平增高。PrG预处理有助于减轻肝功能损害。3.肝脏缺血再灌注的肝组织损伤表现为肝细胞肿胀、肝瘀血、炎性细胞浸润以及肝组织结构破坏。PrG预处理有助于减轻肝组织损伤。4. PrG预处理可增加HSP70、BCL-2的表达及抑制COX-2、ICAM-1的表达,从抑制炎症应激紊乱及抗凋亡途径减轻肝脏缺血再灌注损伤。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第1章 前言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验动物及分组
• 2.2 动物模型制备及标本采集
• 2.3 主要试剂和仪器
• 2.4 检测指标和方法
• 2.5 结果分析与统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 实验各组血清ALT 水平变化
• 3.2 实验各组H E 染色检查结果
• 3.3 免疫组织化学检查结果
• 3.4 RT-PCR 检查结果
• 第4章 讨 论
• 4.1 实验动物模型及实验药物给药剂量的选择
• 4.2 肝脏缺血及再灌注损伤的一般机制探讨
• 4.3 PrG 预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用探讨
• 第5章 结 论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 攻读研究生期间研究成果