2型糖尿病大鼠骨折愈合障碍与骨组织中TNF-α表达变化的研究

论文摘要

目的：建立2型糖尿病大鼠动物模型,并探讨2型糖尿病大鼠肿瘤坏死因子α在骨痂中表达的变化与糖尿病骨折愈合障碍的关系。方法：30只健康雄性8周龄SD大鼠,随机分为对照组15只,喂以普通饲料；实验组15只,喂以高糖高脂饲料。8周后,实验组一次性腹腔注射链脲佐菌素（30mg/kg）,对照组腹腔注射等量枸橼酸盐缓冲液。2周后,将空腹血糖大于16.7mmol/L者纳入实验组继续实验,实验组和对照组都建立大鼠左胫骨牵引成骨的实验动物模型,第二天起开始胫骨延长,延长持续14天。牵引速率为0.15mm/次,2次/天,共0.3mm/天,将实验第8、10周及结束时收集的血清标本分别检测血糖、甘油三酯、总胆固醇、胰岛素。牵引术后的第2,8,15天分组处死动物,采集左胫骨标本,分别作组织学检查（HE染色及免疫组织化学）、RT-PCR检查,每个时间点10只大鼠（对照和实验组各5只）。结果：8周后,实验组大鼠血清甘油三酯、总胆固醇和胰岛素较对照组升高（P<0.01）,空腹血糖无明显差异（P>0.05）。10周后及实验结束时,实验组大鼠空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇较对照组升高（P<0.01）,血胰岛素无明显差异（P>0.05）。免疫组织化学及RT-PCR结果显示实验组较对照组骨组织中TNF-α的表达增高（P<0.01）,且实验组2型糖尿病骨折愈合障碍表现为：对照组X线摄片显示骨折断端之间牵引骨痂形成明显减少；骨痂组织学检查表现为微骨柱排列紊乱,初始基质前沿浅染。结论：高糖高脂饲养联合小剂量STZ一次性腹腔注射建立的糖尿病大鼠模型具有高血糖、高甘油三酯、高胆固醇、胰岛素不低等人类2型糖尿病代谢紊乱特点。2型糖尿病大鼠骨折牵引骨痂生成障碍,骨组织中TNF-α的表达的增高,可能是导致2型糖尿病骨折愈合障碍的原因之一。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 实验仪器
• 2.3 实验试剂
• 2.4 实验试剂的配制
• 2.4.1 0.1mol/L柠檬酸盐缓冲液
• 2.4.2 2%注射用STZ
• 2.4.3 高糖高脂饲料
• 2.5 实验方法和模型制作
• 2.5.1 2型糖尿病大鼠模型建立的方法
• 2.5.2 胫骨牵引成骨模型的制作及标本的获取
• 2.5.3 血清学检查
• 2.5.4 X线检查
• 2.5.5 组织学检查
• 2.5.6 免疫组织化学分析骨组织中的TNF-a的表达
• 2.5.7 RT-PCR分析骨髓腔中的TNF-a的表达
• 2.5.8 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 两组大鼠不同时间点的代谢变化
• 3.1.1 普通饲料、高糖高脂饲料喂养8周后两组大鼠的情况
• 3.1.2 实验组注射STZ 2周后两组大鼠的情况
• 3.1.3 左胫骨牵引2周后既实验结束时两组大鼠的情况
• 3.2 两组大鼠左胫骨骨折牵引2周后间隙内骨痂生成情况
• 3.3 免疫组化结果
• 3.4 RT-PCR结果
• 第四章 讨论
• 4.1 大鼠糖尿病模型与人类2型糖尿病代谢紊乱相似,骨组织中的TNF-a表达增高
• 4.2 2型糖尿病大鼠骨折牵引骨痂生成障碍,骨痂的生成与TNF-a的表达成反比关系
• 4.3 骨组织中TNF-a的表达增高,是2型糖尿病骨折愈合障碍的原因之一
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间的研究成果