论文题目: 海蚯蚓（Arenicola cristata）中抗肿瘤活性成分的分离、鉴定及相关新技术研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 分析化学
作者: 陈彬
导师: 孔继烈
关键词: 海蚯蚓,次级代谢产物,肿瘤,天然产物,新技术
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: “向海洋要药”以解决人类现存的各种疑难病症,是二十一世纪全球研究的一个重要课题;而从海洋生物中寻找和发现具有新药开发潜力的天然次级代谢产物是其先导性研究,内容包括:次级代谢产物的提取、分离、纯化、结构表征和各种药理学研究。尽管每年都有大量的文献报道新发现的海洋生物活性次级代谢产物,但真正能够开发成新药的例子所占比例仍非常之小,而且已开发的新药种类显然不能够满足治疗现存的种类众多的、情况复杂的疾病;况且还存在顽固的疾病耐药性、疑难杂症和层出不穷的新异疾病等情况。所以,继续深入地从广阔的海洋资源中发现新的生物活性的次级代谢产物显得迫切和重要。 本文围绕研究较少的海洋环节动物海蚯蚓次级代谢产物的分离过程,采用化学和生物学中的多种技术手段,进行了一系列具有原始创新性的研究工作,并取得了以下有意义的结果。 一、从海洋环节动物海蚯蚓中获得提取物,并对其进行了广泛、深入的抗肿瘤生物活性的药理学研究,包括细胞毒模型的体外试验和小鼠异种移植物实体瘤模型的体内试验以及鸡胚尿囊膜的血管生成抑制试验。结果表明此提取物具有良好的抗肿瘤生物活性,极有可能发展成为一种癌症治疗的中成药,为“本草纲目”记载传统中药海蚯蚓实现中药的现代化提供研究基础。 二、首次从海洋环节动物海蚯蚓中分离得到了一种新的磺化甾醇,Arenicolsterol A,通过质谱、核磁共振谱和红外波谱等多种波谱的测定确定了它的结构。同时对其进行了细胞毒模型的药理学研究,结果表明它具有很好的抗肿瘤生物活性,极有可能发展成为一种癌症治疗的国家新药,为《本草纲目》所记载的记载传统中药海蚯蚓实现中药的国际化建立了相关理论和实验方法与手段。 三、对海洋环节动物海蚯蚓的脂溶性次级代谢产物提取物进行了药理活性指导下的分离纯化,最终获得6个具有抗肿瘤生物活性的化合物,经核磁共振谱初步鉴定为带有长饱和脂肪烃侧链的甾醇同系物。此工作为海洋中药海蚯蚓中有效化学成分的研究以及潜在新药的深入开发提供了可借鉴的经验。 四、首次运用双色荧光染色、DNA梯度凝胶电泳以及流式细胞术研究了
论文目录:
中文摘要
Abstract
第一章、绪论
第一节、研究背景
1、引言
2、海洋药物研究热点
2．1、经典回顾
2．2、今日热点
2．3、未来展望
3、国内研究现状
4、结语
第二节、海洋药物研究方法概述
1、海洋生物中活性组分的分离纯化方法及结构鉴定手段
2、海洋生物的活性筛选技术
第三节、研究工作的立论依据
1、研究工作的目的和意义
2、研究工作具备的条件
本章小节
参考文献
第二章、海蚯蚓次级代谢产物的提取及药理活性指导下的提取物分离
第一节、生物体概述
第二节、海蚯蚓次级代谢产物提取及分离的实验仪器、药品与方法
1、海蚯蚓次级代谢产物提取的实验仪器
2、海蚯蚓次级代谢产物提取物分离纯化的实验仪器
3、海蚯蚓次级代谢产物提取及分离所用的药品
4、药理实验指导下的分离方法简介
第三节、海蚯蚓次级代谢产物的提取
1、海蚯蚓样品的采集和前处理
2、海蚯蚓次级代谢产物的提取
第四节、药理活性指导下的海蚯蚓次级代谢产物提取物的分离
1、海蚯蚓次级代谢产物提取物的萃取分离
2、海蚯蚓次级代谢产物萃取物的硅胶柱色谱初步分离
3、药理活性指导下的海蚯蚓次级代谢产物粗分物的进一步分离
4、若干具有抗肿瘤活性的海蚯蚓次级代谢产物的纯化
本章小节
参考文献
第三章、分离自海蚯蚓的新的抗肿瘤磺化甾醇类化合物，Arenicolsterol A
1、引言
2、结果和讨论
3、实验部分
3．1、方法简述
3．2、动物材料
3．3、样品的分离和纯化
本章小节
参考文献
第四章、分离白海蚯蚓的提取物(ACE)、分离物(ACF)和Arenicolsterol A的药理学研究
第一节、海蚯蚓提取物(ACE)的药理学研究
1、引言
2、材料和方法
2．1、ACE和ACF的制备
2．2、细胞培养
2．3、体外细胞毒活性分析
2．4、ACE的鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成抑制分析
2．5、ACE的人肿瘤移植模型体内评价
3、结果
3．1、ACE和ACF的制备
3．2、体外细胞毒活性分析
3．3、ACE对鸡胚尿囊膜中的血管生成抑制作用
3．4、ACE的人肿瘤移植模型体内评价
4、讨论
第二节、新的磺化甾醇，Arenicolsterol A的药理学研究
1、引言
2、材料和方法
2．1、材料
2．1．1、细胞株
2．1．2、样品与试剂
2．2、方法
2．2．1、细胞培养
2．2．2、MTT检测
2．2．3、肿瘤干细胞集落生长抑制
2．2．4、双荧光染色
2．2．5、DNA琼脂糖凝胶电泳
2．2．6、流式细胞仪分析
3、结果
3．1、Arenicolsterol A对Hela细胞的生长抑制作用
3．2、双荧光染色观察凋亡细胞
3．2．1、凋亡细胞形态特征
3．2．2、药物浓度对细胞凋亡的影响
3．3、DNA琼脂糖凝胶电泳
3．4、流式细胞仪分析
4、讨论
本章小节
参考文献
第五章、海蚯蚓次级代谢产物分离中的新技术应用
第一节、海蚯蚓次级代谢产物分离中的新技术研究背景
1、引言
2、天然产物或药物分离、分析中新技术应用
3、结语和展望
第二节、HPLC与CCD联用检验海蚯蚓次级代谢产物分离中的样品纯度
1、引言
2、实验部分
2．1、标准试剂
2．2、采样，提取和纯化
2．3、薄层流通光谱池的设计
2．4、HPLC和CCD光谱仪的工作条件
2．5、分析方法
3、结果和讨论
3．1、薄层流通光谱池的设计
3．2、分析系统可靠性检验
3．3、检测含有少量丹参酮Ⅰ的丹参酮ⅡA样品
3．4．检测分离白海蚯蚓的HQY-A样品
本章小结
参考文献
下一步工作设想
结论
附录：论文发表情况
致谢
论文独创性声明
论文使用授权声明
发布时间: 2005-09-19
相关论文
- [1].蚯蚓和乳酸菌（L4）对猪粪尿臭气浓度和免疫机能的影响及其机理研究[D]. 曾正清.中国农业大学2003
- [2].海绵活性天然产物分离及结构确定[D]. 薛松.中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）2003
- [3].参环毛蚓中抗栓活性蛋白酶的研究[D]. 张东方.辽宁中医学院2004
- [4].蚯蚓（Eisenia fetida）生态免疫系统研究Ⅰ[D]. 王冲.中国农业大学2005
- [5].蚯蚓活动对稻麦轮作土壤氮、磷的影响[D]. 王霞.南京农业大学2005
- [6].中药猫爪草抗肿瘤有效部位的研究[D]. 王爱武.山东中医药大学2005
- [7].山茱萸多糖化学、生物活性及树脂吸附法分离植物有效成分研究[D]. 李平.北京化工大学2005
- [8].三种海洋生物和一种陆地植物化学成分及其生物活性研究[D]. 殷帅文.中国科学院研究生院（海洋研究所）2005
- [9].蚯蚓蛋白同功酶III-1、II结构与功能的研究[D]. 赵静.吉林大学2003
- [10].蚯蚓组织中一组核酸酶酶学、生物学作用及其机制的研究[D]. 杨琦.山西医科大学2007