O型口蹄疫病毒VP1蛋白的比较与牛O型表位肽基因工程疫苗的研制

论文摘要

口蹄疫（Foot and mouth disease, FMD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus, FMDV）引起的主要侵害猪、牛等偶蹄动物的高度接触传染性疾病。在FMDV七个血清型中,O型是发现最早并流行最广的型别之一。目前对其免疫控制的主要手段是灭活疫苗的接种,但有一定局限性,如成本高、接种量大及有散发活毒的危险。为此,我们钓取了O型FMDV流行株VP1的编码基因,并结合中国及周边国家病毒株序列的比较分析,在此基础上,设计、构建了两株牛O型口蹄疫表位肽基因工程疫苗,并对其免疫效果进行了检测。结果表明:一FMDV流行株的VP1基因与猪O型FMDV病毒株O/HKN/3/75的氨基酸同源性高达98%;O型FMDV西藏株（泛亚）VP1蛋白的RGD基序和G-H环的空间位置与文献所报道的一致;构建的新疆株牛O型蛋白疫苗和西藏株牛O型蛋白疫苗与猪O型FMDV疫苗免疫的阳性血清存在交叉识别;西藏株牛O型蛋白疫苗可在豚鼠诱生出西藏株口蹄疫病毒的特异性抗体。本研究为研制更为有效的牛O型口蹄疫基因工程疫苗提供了可参考的实验依据。

论文目录

• 提要
• 英文缩写词表
• 引言
• 材料与方法
• 1. 主要材料
• 1.1 试剂
• 1.2 质粒和菌株
• 1.3 实验动物及其它
• 1.4 主要实验设备
• 2. 主要方法
• 2.1 重组质粒的构建
• 2.3 表达产物的鉴定
• 2.4 重组蛋白的镍亲和层析纯化
• 2.5 基因工程疫苗免疫豚鼠
• 2.6 间接ELISA 检测豚鼠血清
• 2.7 重组蛋白免疫豚鼠血清的中和实验
• 实验结果
• 1. O型FMDV 流行株VP1 基因的钓取、克隆及序列分析
• 1.1 O 型FMDV 流行株VP1 基因的钓取及克隆
• 1.2 O 型FMDV 流行株VP1 基因的序列分析
• 1.3 O 型FMDV 不同株间VP1 氨基酸序列的比较
• 2. 牛O 型FMDV 西藏株VP1 蛋白空间结构的预测
• 3. 重组牛O 型口蹄疫疫苗的构建
• 3.1 表位疫苗的基本结构
• 3.2 表位疫苗的基因合成、克隆及序列测定
• 4. 重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达
• 5. 重组蛋白的镍亲和层析纯化及WESTERN BLOT 分析
• 6. 重组蛋白的免疫学活性检测
• 6.1 间接ELISA
• 6.2 微量细胞中和试验
• 6.3 乳鼠中和试验
• 图表
• 讨论
• 1.FMDV的抗原性变异
• 2.对于重组蛋白结构的思考
• 3.重组蛋白质免疫效果的筛选平台
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 攻读硕士期间已（待）发表的文章
• 致谢