论文摘要
目的:观察多孔钽材料植入兔背部肌肉后免疫反应与组织形态学变化情况,验证多孔钽材料生物学特性,为临床应用提供实验依据。方法:选择32只日本大耳白兔为实验动物,将多孔钽材料手术植入兔背部右侧竖脊肌肌肉内,随机分为4组,每组8只,分别于术后2周、4周、8周及12周处死。1、实验动物的一般观察:包括动物活动及伤口愈合等情况。2、酶联免疫吸附试验:全部动物术前1天及处死前抽取耳缘静脉血,利用ELISA测定CD4+、CD8+含量以及CD4+/CD8+比值。3、组织形态学观察,每组动物处死后立即切取包括植入材料在内的周围1cm肌肉,按下列方法观察:①大体观察,观察植入材料与周围肌肉粘着的情况;②组织形态学观察,每批标本随机分为2组,其中4份标本,顺肌肉纤维方向分离肌组织,将多孔钽材料取出,a.肌肉组织光镜观察:切取与多孔钽材料相邻肌肉组织约0.5mm3,制备病理切片普通HE染色后光镜观察;b.多孔钽材料扫描电镜观察:多孔钽材料经液氮冷冻断裂形成自然断面,电镜下观察表面超微结构;c.硬组织切片光镜观察:将另4份含多孔钽材料的肌肉标本,通过金属磨片制备硬组织切片,丽春红三色法染色后光镜观察。结果1.大体观察:实验动物进食、活动正常,取材未见皮下、肌肉的组织水肿和充血,无异常分泌物。肌肉与材料粘着紧密。2.酶联免疫吸附试验:实验组与对照组各时间点的T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+的含量以及CD4+/CD8+比值无显著差异（P>0.05）。3.组织形态学观察:a.肌肉组织光镜观察:多孔钽植入术后2周（植入材料取出）可见植入材料与肌肉交界面有少量的炎性细胞浸润,可见散在成纤维细胞增生伴有少量新生毛细血管形成,并见增生的纤维组织包囊形成。术后4周淋巴细胞比2周时明显减少,仍见成纤维细胞增生及纤维组织包囊。术后8周,材料与肌肉交界面淋巴细胞消失,纤维包囊变薄。术后12周,纤维组织囊壁较前更薄。肌肉的形态及结构均正常。b.多孔钽材料扫描电镜观察:肌纤维及新生纤维组织在材料表面贴附紧密,并连同胶原纤维一道向孔隙内生长。随着时间增加,肌肉组织呈大片状平铺于材料表面,几乎无材料裸露。c.硬组织切片光镜观察:植入材料-肌肉结合处底部由纤维囊壁包绕,少量纤维及小血管长入材料孔隙内部。未见吞噬细胞、异物巨细胞及炎细胞浸润。材料与肌肉组织结合紧密。植入后期材料与肌肉交接处纤维囊壁基本消失。结论1.钽金属材料肌肉组织植入后与周围组织结合紧密,无明显过敏及炎症反应,具有良好的组织相容性。2.钽金属材料植入体内不同时期T淋巴细胞亚群无显著变化,证实此材料无免疫原性及排斥反应,无细胞毒性,可作为组织工程较理想的支架材料。
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