抗肝癌单链抗体的体外亲和力成熟研究

论文摘要

第一部分 抗肝癌噬菌体单链抗体突变库的构建和筛选 目的：体外模拟抗体体内成熟过程，构建抗肝癌噬菌体单链抗体突变库，并从中筛选出与肝癌细胞特异性结合的单链抗体。 方法：采用错配PCR和DNA改组技术依次对原始抗肝癌单链抗体A4-16重链可变区和轻链可变区分别进行突变构建抗肝癌噬菌体单链抗体突变库；利用噬菌体展示技术对突变库进行4轮富集筛淘及ELISA鉴定；以ELISA方法测定所获阳性克隆的特异性。 结果：成功构建了抗肝癌噬菌体单链抗体突变库，目的基因插入率为91％，实际库容量为4.5×107；经过4轮富集筛淘及ELISA鉴定后获得4株阳性克隆M1、M2、M3、M4；对阳性克隆特异性分析发现，M1、M2、M3、M4表达的噬菌体抗体均与三种肝癌细胞结合，而与正常肝细胞、肠癌细胞、胃癌细胞和胰腺癌细胞不结合。 结论：（1）错配PCR结合DNA改组技术是进行抗体体外亲和力成熟的一种有效且简便的手段；（2）经筛选获得的4株阳性克隆M1、M2、M3、M4与原始克隆A4-16同样具有良好的抗原结合特异性。 第二部分 抗肝癌噬菌体抗体相对亲和力测定和氨基酸序列分析 目的：比较阳性克隆M1、M2、M3、M4与原始克隆A4-16噬菌体抗体的相对亲和力，并且分析阳性克隆中突变的氨基酸序列；将所有发生在CDR区的突变进行组合后获得的新突变体DM的亲和力进行初步评价。 方法：以硫氰酸盐洗脱法测定4株阳性克隆M1、M2、M3、M4和原始克隆A4-16表达的噬菌体抗体相对亲和力；选取高亲和力的阳性克隆进行基因序列测定并确定序

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 抗肝癌噬菌体单链抗体突变库的构建和筛选
• 前言
• 实验设计与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 抗肝癌噬菌体抗体相对亲和力测定和氨基酸序列分析
• 前言
• 实验设计与方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 抗肝癌可溶性单链抗体的表达和亲和力常数测定
• 前言
• 实验设计与方法
• 结果
• 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 缩写词表
• 在校期间发表的论文
• 致谢