论文摘要
第一章AsiaⅠ型口蹄疫病毒AKT毒株VP1基因序列分析为了克隆AsiaⅠ型口蹄疫病毒AKT毒株VP1基因中的抗原表位,首先分离AsiaⅠ型口蹄疫病毒阿克陶毒株（AKT）的RNA,利用反转录PCR方法从RNA中扩增出VP1基因约633bp全长的cDNA片段,将PCR扩增得到的目的基因片段与pMD19-T载体连接后,通过测序反应测得VP1基因的全部核苷酸序列。利用DNAStar软件比对分析AKT毒株与AsiaⅠ型口蹄疫病毒其他流行毒株如印度毒株（IND）、云南保山毒株（YNBS）、江苏毒株（jiangsu）VP1基因的核苷酸序列及氨基酸序列的同源性。序列分析表明,AKT毒株与印度毒株（IND）、云南保山毒株（YNBS）、江苏毒株（jiangsu）的VP1基因核苷酸序列同源性分别为92.4%,83.3%,84.5%,对应的氨基酸序列同源性分别为94.8%,91.0%,89.6%。分析AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因序列,为研究AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因的变异规律及构建有效的抗AsiaⅠ型口蹄疫病毒基因工程疫苗打下基础。第二章AsiaⅠ型口蹄疫病毒基因工程多肽疫苗的制备及其免疫原性分析第一章测得AsiaⅠ型口蹄疫病毒AKT毒株编码VP1蛋白133-163位氨基酸的核苷酸序列,另从GenBank中获得AsiaⅠ型口蹄疫病毒编码VP2蛋白1-33位氨基酸的核苷酸序列,设计引物分别PCR扩增VP1（133-163）及VP2（1-33）表位肽基因片段,将扩增出的基因片段连接在大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因（简称LacZ’）的3’末端,构建表达质粒pLacZ’-VP1,pLacZ’-VP2。将这两个抗原表位组成VP1（133-163）-VP2（1-33）-VP1（133-163）串联重复结构,化学合成该串联表位基因片段,连接在β-半乳糖苷酶基因或IgG重链恒定区基因的3’末端,构建两种重组表达质粒pLacZ’-VP1（133-163）-VP2（1-33）-VP1（133-163）（命名为pT1）,pIgG-VP1（133-163）-VP2（1-33）-VP1（133-163）（命名为pT2）,表达融合蛋白后分别配制成疫苗,通过Western blotting、血清中和抗体效价测定、T淋巴细胞增殖及豚鼠抗病毒保护实验分析所构建疫苗的免疫原性及有效性。结果显示,pT1、pT2表达的融合蛋白能够诱发豚鼠产生较高的中和抗体及刺激豚鼠T细胞增殖反应。pT1、pT2两种疫苗2次免疫豚鼠,能抵抗100 ID50AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻击,其保护率为100%。pT2疫苗1次免疫豚鼠后也有70%的豚鼠能抵抗100 ID50AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻击。
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