棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒（HearSNPV）ORF5、ORF28和ORF29基因分析

论文题目: 棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒（HearSNPV）ORF5、ORF28和ORF29基因分析

论文类型: 博士论文

论文专业: 农业昆虫与害虫防治

作者: 郭忠建

导师: 张传溪

关键词: 基因,基因,基因,表达,融合蛋白,定位,糖基化,沉降,生物测定,毒力,粒子产量,多角体形成

文献来源: 浙江大学

发表年度: 2005

论文摘要: 杆状病毒（Baculovirus）是节肢动物,特别是鳞翅目昆虫重要的病原微生物,在重要农林害虫的生物防治中具有广阔的应用前景,具有化学杀虫剂无法比拟的优点。杆状病毒的分子生物学研究已取得了很大进展。到目前为止,已有26种杆状病毒,包括16种鳞翅目昆虫核型多角体病毒,7种颗粒体病毒的基因组序列被测定。开发出的杆状病毒表达载体系统、重组杆状病毒杀虫剂、杆状病毒作为基因治疗的载体、重组杆状病毒表面展示系统为科学研究和实际运用作出了巨大贡献。棉铃虫（Helicoverpa armigera）是一种重要的世界性农业害虫,其大暴发时能给多种农产品带来重大损失。棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒（HearSNPV）是棉铃虫的一种天然病原微生物,选择性高,感染力强,自被分离以来,已广泛应用于棉铃虫的防治。已测定基因组序列的HearSNPV有C1株和G4株,一些基因的分析也取得很大进展。本文分析了HearSNPV C1株ORF5、ORF28和ORF29三个基因,同时比较了C1株和G4株在生物学上的差异。主要研究结果如下: 1.ORF5基因全长192bp,编码63aa的多肽。在起始密码子ATG上游210nt和227nt处各有一个GATA盒,14nt处有个杆状病毒早期转录基序CAGT。ORF5基因与MacoNPV-90/2 ORF8、MacoNPV-96B ORF8、AcMNPV ORF152、SpltMNPV ORF5和RoMNPV ORF147的同一性分别为53%、58%、50%、54%和47%。构建了ORF5与pGEX-4T-2的GST融合表达载体,在大肠杆菌BL21中得到了表达,并制备了兔多克隆抗体。 2.ORF28基因全长252bp,编码一个泛素蛋白。在起始密码子ATG上游175nt和228nt处有TATA盒,上游30nt和107nt处有杆状病毒晚期转录基序A/T/GTAAG。在其编码的泛素氨基酸序列中,Thr9、Thr25、Thr55和Ser78是潜在的磷酸化位点;与其它杆状病毒泛素蛋白和真核生物泛素蛋白有较大的差异,主要体现在aa15-32和aa51-57两个区域。在大肠杆菌中表达了该基因,制备了兔多克隆抗体。用所制备的多克隆抗体对该基因在细胞中的表达情况进行检测,发现该基因在感染后36h表达,其表达产物大小约为14kDa,大于推测的理论分子量,表明该蛋白翻译后经过了修饰。对其定位研究发现,该蛋白连在BV病毒粒子上。用GST融合蛋白沉降技术,检测到一个可能与ORF28泛素蛋白相互作用的蛋白质,大小约37kDa,为HzAMl细胞的一个基因所编码,而非病毒基因所表达。 3.ORF29为HearSNPV及其变种HzSNPV所特有,全长507bp,编码一个分子量约20.4kDa的多肽。在起始密码子ATG前15nt有个杆状病毒早期转录起始基序CAGT。在其蛋白质序列中,Thr43、Ser20、Ser127、Ser136和Phe156是潜在的磷酸化位点;在aa66-82、aa4-76、aa55-90和aa82-98处分别存在一个转录因子Tfb2基序、bromodomain类似结构域、Half-A-TPR（HAT）类似重复序列和跨膜结构域。用制备的兔多克隆抗体对其在细胞中的表达情况进行检测,发

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

第Ⅰ部分文献综述

第1章杆状病毒基础研究进展

第2章杆状病毒运用研究进展

第Ⅱ部分研究背景、内容和技术路线

第3章立题依据、研究内容和技术路线

第Ⅲ部分研究内容

第4章 HearSNPV C1株ORF5、ORF28、ORF29基因的序列分析

第5章 HearSNPV ORF5、ORF28、ORF29基因在大肠杆菌中的表达

第6章 HearSNPV ORF5、ORF28、ORF29基因的兔抗多克隆抗体制备

第7章 HearSNPV ORF28、ORF29基因产物的分析

第8章与HearSNPV ORF28泛素蛋白互作蛋白的分析

第9章 HearSNPV C1株和G4株的生物学比较研究

结论

参与文献

致谢

发布时间: 2005-07-22

参考文献

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棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒（HearSNPV）ORF5、ORF28和ORF29基因分析

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