论文摘要
编码异戊烯基转移酶的ipt基因与拟南芥衰老特异启动子Psag12构成的嵌合基因经由农杆菌介导转入烟草K326中。目前已建立起高效转化体系,经分子生物学方法检测确认获得的再生植株为转基因株系,初步生理生化分析结果表明这些转基因株系与未转化植株相比表现出明显的叶片衰老延缓,农艺性状得到明显改良。主要实验结果如下:研究了烟草K326的叶片分化再生条件,试验表明,附加0.1mg╱L IAA+1.5mg/L BA的MS培养基为诱导叶片分化再生的合适培养基:研究了烟草K326对潮霉素(Hyg)的敏感浓度,试验表明,7.5mg/L的潮霉素浓度为合适的筛选浓度;研究了农杆菌的侵染条件,建立了烟草K326的遗传转化体系。通过根癌农杆菌叶盘转化法,获得了34棵再生植株,经PCR及斑点杂交证实了外源基因已整合入烟草K326基因组中。对获得的4棵转基因植株进行了形态学及初步的生理生化分析。结果表明,有3棵转基因株系表现出明显的农艺性状改良的趋势。与未转化植株相比,株高及总叶片数与对照组没有差别,但植株下部叶片衰老得到明显延缓,全株青叶片数明显增多;叶绿素含量较对照组明显提高,离体叶片叶绿素含量下降速率明显小于对照组,叶片的糖和蛋白质含量均有一定程度的提高。
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致谢摘要1 文献综述1.1 细胞分裂素生物合成与分子调控1.1.1 细胞分裂素的生理作用1.1.1.1 细胞分裂素在植物叶片延衰中的作用1.1.1.2 细胞分裂素在植物抗逆中的作用1.1.1.3 细胞分裂素在植物抗虫、抗病中的作用1.1.2 细胞分裂素的生物合成途径1.1.3 ipt与细胞分裂素生物合成调控1.1.3.1 ipt基因与不同启动子相融合的遗传转化研究进展1.1.3.2 ipt基因与衰老相关启动子SAG12融合转化植物进展1.2 烟草基因工程研究及应用1.2.1 烟草基因工程发展历程1.2.2 烟草基因工程应用1.2.2.1 烟草抗性基因工程1.2.2.2 烟草品质改良1.2.2.3 烟草生物反应器系统1.2.3 烟草基因工程面临问题1.3 烟叶成熟度与早衰1.3.1 烟叶成熟度对烟叶品质的影响1.3.2 烟叶早衰对烟叶品质的影响2 引言3 材料与方法3.1 主要材料与仪器3.1.1 供试材料3.1.2 菌株3.1.3 主要试剂3.1.4 主要培养基3.1.5 主要仪器3.2 方法3.2.1 烟草K326遗传转化体系的建立3.2.1.1 烟草K326无菌苗的诱导3.2.1.2 烟草叶片再生体系建立3.2.1.3 烟草K326种子萌发及生长对Hyg的敏感浓度测定3.2.1.4 烟草K326叶片组织及再生对Hyg的敏感浓度测定3.2.2 遗传转化及抗潮霉素植株的获得3.2.2.1 菌株的活化及侵染液的制备3.2.2.2 转化及转化植株的筛选3.2.3 分子检测3.2.3.1 PCR扩增3.2.3.2 斑点杂交3.2.4 转基因植株的农艺形状考察3.2.4.1 植物学特征3.2.4.2 可溶性总糖含量测定3.2.4.3 叶片蛋白质含量测定3.2.4.4 离体叶片体外衰老比较4 结果与分析4.1 烟草K326遗传转化体系的建立4.1.1 IAA与BA不同浓度组合对烟草叶片再生的影响4.1.2 不同潮霉素浓度对烟草种子萌发和生长的影响4.1.3 不同潮霉素浓度对烟草叶片再生的影响4.2 转化及抗潮霉素植株的获得4.3 分子生物学方法检测4.3.1 PCR检测4.3.2 斑点杂交检测4.4 农艺性状4.4.1 植物学特征4.4.2 可溶性糖含量4.4.3 叶片蛋白质含量4.4.4 离体叶片衰老比较及叶绿素含量比较4.4.4.1 体外叶片衰老比较4.4.4.2 叶绿素含量5 结论与讨论5.1 结论5.2 讨论5.2.1 激素对烟草K326叶片再生的影响5.2.2 烟草K326对潮霉素的敏感浓度5.2.3 PSAG12-ipt基因表达与烟草改良5.2.4 需要进一步开展的工作参考文献Abstract
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标签:烟草论文; 异戊烯基转移酶论文; 基因转化论文; 转基因株系论文; 叶片衰老论文; 细胞分裂素论文;