论文摘要
目的：通过改变E-钙粘蛋白的N-糖基化以增强肿瘤细胞粘附连接和紧密连接的稳定性来抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移可能是一种新的肿瘤基因治疗方法。本实验将研究低糖基化的E-钙粘蛋白质粒转染Tca8113舌癌细胞对舌癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：1、以Tca8113舌癌细胞系作为研究样本,应用含低糖基化的E-钙粘蛋白（V13）基因的质粒和含野生型E-钙粘蛋白（E-cadherin）基因的质粒分别转染Tca8113舌癌细胞,G418筛选出转染成功的细胞进行细胞培养,并且通过western blot实验检测转染基因的稳定表达。2、通过MTT法绘制细胞生长曲线,观察细胞的增殖能力；3、运用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期,以了解细胞的增殖活性；4、应用BrdU掺入试验测定各组细胞BrdU阳性的比率,以观察各组细胞DNA复制的差异；综合上述三项实验的结果判定低糖基化的E-钙粘蛋白（V13）基因的质粒转染Tca8113舌癌细胞对细胞增殖活性的影响；5、通过Transwell小室体外细胞侵袭实验观察相同条件下各实验组细胞穿膜细胞数的差异,以观察低糖基化的E-钙粘蛋白（V13）基因的质粒转染Tca8113舌癌细胞对细胞侵袭性能的影响；6、通过体外细胞划痕实验计算比较各组细胞间划痕愈合的差异,以得出低糖基化的E-钙粘蛋白（V13）基因的质粒转染Tca8113舌癌细胞对细胞迁移能力的影响。结果：1. Western blot结果显示：低糖基化E-钙粘蛋白（V13）基因质粒和野生型E-钙粘蛋白基因质粒转染舌癌细胞后均稳定表达,以flag抗体作为一抗的western印迹实验结果显示,减少翻译后N-糖基化修饰的低糖基化E-钙粘蛋白（V13）的分子量小于野生型E-钙粘蛋白的分子量,低糖基化E-钙粘蛋白基因转染的舌癌细胞表达的低糖基化E-钙粘蛋白的分子量为120KD,野生型E-钙粘蛋白基因转染表达的野生型E-钙粘蛋白的分子量为150KD,而空白对照细胞无flag标记的蛋白表达。2.MTT结果显示：相对于Tca8113空白对照细胞,低糖基化E-钙粘蛋白（V13）基因转染Tca8113细胞的增殖活性有明显降低,自48小时后V13转染细胞的OD比值显著低于空白对照细胞,而野生型E-钙粘蛋白转染的Tca8113细胞的增殖活性则改变不明显；3.流式细胞术结果显示：相对于Tca8113空白对照细胞,低糖基化E-钙粘蛋白（V13）基因转染Tca8113细胞的S期比率有明显降低（下调了约18.42%）,而野生型E-钙粘蛋白转染的Tca8113细胞的S期细胞比率则无显著变化；4. BrdU掺入实验结果显示：Tca8113空白对照细胞Brdu阳性细胞的比率为最高,野生型E-钙粘蛋白转染的Tca8113细胞的Brdu阳性率稍低,两者相比无显著差异（P>0.05）,而低糖基化E-钙粘蛋白（V13）基因转染的Tca8113细胞Brdu阳性率则显著降低,与Tca8113对照细胞之间差异显著（P<0.01）即低糖基化E-钙粘蛋白（V13）基因转染的Tca8113细胞合成DNA的能力明显减弱；5. Transwell小室体外细胞侵袭实验结果显示：相对于Tca8113空白对照细胞,低糖基化E-钙粘蛋白（V13）基因转染Tca8113细胞侵袭能力明显降低,而野生型E-钙粘蛋白转染的Tca8113细胞侵袭能力则无明显改变；6.细胞划痕试验结果显示：相对于Tca8113空白对照细胞,低糖基化E-钙粘蛋白（V13）基因转染Tca8113细胞的迁移能力明显降低,而野生型E-钙粘蛋白转染的Tca8113细胞迁移能力则无显著变化；结论：低糖基化E-钙粘蛋白（V13）基因转染比野生型E-钙粘蛋白基因转染Tca8113舌癌细胞能更显著地抑制舌癌细胞的体外增殖、侵袭性和迁移性。本研究为抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移提供了一种合理、可行的新思路、新途径,为用低糖基化E-钙粘蛋白基因转染抑制肿瘤增殖、侵袭和迁移奠定了实验和理论基础。