抗CD44单克隆抗体A3D8对卵巢癌球形体形成细胞增殖的影响及其机制的探讨

论文摘要

目的：观察抗CD44单克隆抗体A3D8对卵巢癌实体瘤源、腹水源、细胞系源球形体形成细胞增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制,为卵巢癌的治疗开辟新的研究方向。方法：本实验以分别从卵巢癌病人实体瘤组织、腹水、细胞系分选出来的卵巢癌球形体形成细胞为研究对象。1.用无血清特殊培养基（special growth medium,SGM）培养卵巢癌球形体细胞。用抗CD44单克隆抗体A3D8分别为（0.2、2、6）μg/mL、2.5μg/mL顺铂（DDP）及联合用药分别处理24、48、72h后,MTS法测定对卵巢癌球形体形成细胞增殖能力的影响。2.AO/EB双重染色法对卵巢癌球形体形成细胞染色,荧光显微镜下观察不同剂量的A3D8对细胞凋亡的影响。3.流式细胞术检测2μg/mL A3D8、2.5μg/mL（?）铂及联合用药处理24h后,对卵巢癌球形体形成细胞诱导凋亡的作用。4.应用流式细胞术观察2μg/mL A3D8对三种卵巢癌球形体形成细胞线粒体膜电位的影响。5.Western blot检测2μg/jmL A3D8作用24h后,对抑凋亡因子Bcl-2、促凋亡因子Caspase-3蛋白表达水平的影响。结果：1.A3D8能够抑制卵巢癌实体瘤源、腹水源、细胞系源球形体形成细胞的增殖（P<0.05）,而且随着剂量的增加和时间的延长,抑制作用增强,联合用药抑制作用强于单独使用DDP。2.不同剂量A3D8作用细胞后,通过AO/EB染色,荧光显微镜下可看到活细胞核染色质被染成均匀的绿色,早期凋亡细胞被染成桔黄色,晚期凋亡细胞则被染成桔红色或红色,染色质聚集,核染色质呈固缩状或圆珠状,并可见凋亡小体的形成,而且凋亡率随A3D8剂量的增加和时间的延长而增高（P<0.05）；与顺铂联用,凋亡率高于单独使用DDP（P<0.05）。3.2μg/ml A3D8作用于卵巢癌球形体形成细胞24h后凋亡率明显增高,且联合用药组凋亡率高于单用药。4.2μg/ml A3D8作用于卵巢癌球形体形成细胞24h后,线粒体膜电位下降,与顺铂联用,线粒体膜电位下降高于单独用顺铂组。5.2μg/ml A3D8作用于卵巢癌实体瘤源、腹水源、细胞系源球形体形成细胞24h后Bcl-2蛋白表达水平分别降低为对照组水平的68%、71%、39%,Caspase-3蛋白表达水平分别为对照组水平的1.16、1.37、2.39倍。结论：A3D8可抑制卵巢癌实体瘤源、腹水源、细胞系源球形体形成细胞的增殖,诱导细胞凋亡。其机制可能是A3D8通过降低卵巢癌球形体形成细胞线粒体膜电位,损伤细胞线粒体,增加细胞内促凋亡物质活性因子Caspase-3的产生和减少凋亡抑制因子Bcl-2的产生,诱导卵巢癌球形体形成细胞凋亡,从而使肿瘤细胞增殖受到抑制,达到抑制肿瘤生长的目的。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、A3D8对卵巢癌球形体形成细胞增殖的影响
• 1.1 材料和方法
• 1.1.1 细胞
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 主要仪器和设备
• 1.1.4 主要试剂的配置
• 1.1.5 细胞培养
• 1.1.6 细胞增殖
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 二、A3D8对卵巢癌球形体形成细胞凋亡的影响
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 细胞
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器和设备
• 2.1.4 主要试剂的配置
• 2.1.5 AO/EB染色观察A3D8对细胞形态学的影响
• 2.1.6 流式细胞仪检测A3D8对细胞凋亡的影响
• 2.2 结果
• 2.2.1 AO/EB染色观察A3D8对细胞形态学的影响
• 2.2.2 流式细胞仪检测A3D8对细胞凋亡的影响
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 三、A3D8对卵巢癌球形体形成细胞线粒体膜电位的影响
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 细胞
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 主要仪器和设备
• 3.1.4 流式细胞仪检测细胞膜电位的变化
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 四、A3D8对细胞凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3的影响
• 4.1 材料和方法
• 4.1.1 细胞
• 4.1.2 主要试剂
• 4.1.3 主要试剂的配置
• 4.1.4 主要仪器和设备
• 4.1.5 蛋白质的提取
• 4.1.6 western blot
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢