酵母pacl基因的克隆、原核表达及表达产物的酶活性检测

论文摘要

本项研究改进了提高提取酵母基因组DNA 纯度的方法,并设计出一对特异引物,引物1: 5′-CCGGTACCCGGGCATATGGGACGGTTTAAGAG-3′, 引物2: 5′-GAGGATCCTTAACGGGCAAACTTAG-3′,经PCR 扩增获得一条约1.1kb 的核酸带。通过对重组质粒pGEM-pacI 中pacI 基因的序列测定,获得基因片段为1092bp 的全长pacI 基因,可编码364 个氨基酸。与首次报道的pacI 基因序列相比较,发现该项研究的重组质粒#1（编号为2.1459）和#2（编号为2.274）分别有8 个和2 个核苷酸与首次的不同,但后两者与首次的同源性都各自达到99.3%和99.8%, 并都是核苷酸序列G430变化为A430,使得编码的氨基酸从Glu 变为Lys。在pacI基因的原核表达中,产生了分子量为43Kda 的蛋白条带,证明pacI 基因获得高效表达,且表达产物存在于上清液和沉淀中,上清中的表达蛋白是以可溶性的形式存在,而沉淀中的蛋白是以非可溶的包涵体形式存在的。利用上清液蛋白对dsRNA 的降解活性确定pacI 基因编码蛋白的酶活性,证明pacI 基因具有降解TMV-dsRNA、CMV-dsRNA 的作用。制备了表达产物的抗血清。

论文目录

• 第一部分 文献综述
• 植物抗病毒转基因工程的研究进展
• 1 抗病毒植物基因工程产生的的分子基础
• 2 抗病毒植物基因工程的策略
• 3 植物抗病毒基因工程的前景展望
• 第二部分 研究内容
• 实验一酵母pacI 基因的克隆与序列分析
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 小结与讨论
• 实验二酵母pacI 基因在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物对双链 RNA 的体外降解活性
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果与分析
• 4 小结与讨论
• 实验三pacI 基因植物表达载体的构建
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果与分析
• 4 小结与讨论
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 个人简历