膨化全脂大豆对瘤胃微生物氢化作用和组织中△9-脱氢酶mRNA表达量的影响

论文摘要

本课题以探讨膨化全脂大豆提高牛奶中共轭亚油酸（CLA）含量的作用机理为目的,研究了膨化全脂大豆对瘤胃微生物氢化PUFA的影响（试验一）以及添加膨化全脂大豆对奶牛肝脏和乳腺中A9-脱氢酶mRNA表达量的影响（试验二）,从分子和细胞水平初步揭示了PUFA转化为CLA的作用机理。试验一:膨化全脂大豆对瘤胃微生物氢化PUFA的影响研究。本试验旨在研究膨化全脂大豆对瘤胃氢化作用的影响,进而研究不同区系的瘤胃微生物对膨化全脂大豆的氢化作用。采用体外模拟瘤胃发酵的方式进行试验,各处理分别为:（1）用瘤胃液分别对膨化全脂大豆、焙烤大豆和生大豆进行培养;（2）用不同区系的瘤胃微生物,即原虫、细菌、真菌和全瘤胃液对膨化全脂大豆进行培养。在培养到0.5h、1h、3h和6h分别进行PUFA和CLA的测定,每一处理3个重复。结果表明:膨化全脂大豆不会对体外模拟瘤胃中NH3-N和TVFA的浓度造成不良影响;膨化全脂大豆可以使体外模拟瘤胃中c9,t11-CLA的可检测浓度得以长时间保持;体外模拟瘤胃中t11-C18∶1的浓度在各原料间差异不显著,但是膨化全脂大豆组含量在1h,3h和6h分别比焙烤大豆组高出2.6%,2.2%和3.0%。长时间保持瘤胃中高浓度c9,t11-CLA可以促进消化道的吸收,瘤胃中t11-C18∶1浓度的提高可以为组织合成CLA提供更多的前体物,这可能是膨化全脂大豆提高奶中CLA含量的原因之一。试验二:添加膨化全脂大豆对奶牛肝脏和乳腺中Δ9-脱氢酶mRNA表达量的影响。本试验旨在研究添加膨化全脂大豆对肝脏和乳腺中Δ9-脱氢酶mRNA表达量的影响。选择10头中国荷斯坦奶牛,按照完全随机试验安排分成试验组和对照组,试验期40天,对照组饲喂TMR日粮,试验组用1.7 kg/d的膨化全脂大豆替代TMR日粮中部分精料,但保持日粮营养水平不变。结果表明:添加膨化全脂大豆,可以使肝脏中Δ9-脱氢酶的mRNA表达量降低18.33%;可以诱导乳腺中Δ9-脱氢酶mRNA的表达,使其提高77.77%。诱导乳腺中Δ9-脱氢酶mRNA的表达可能是膨化全脂大豆提高奶中c9,t11-CLA含量的又一重要因素。综上所述,膨化全脂大豆在CLA合成的两个途径中都发挥了重要的作用,一是在瘤胃中它可以提供较多的合成CLA的前体物和合成一定量的CLA,二是它可以诱导乳腺中Δ9-脱氢酶的mRNA表达量,使乳腺在合成CLA时发挥更大的作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 PUFA和 CLA
• 1.1.1 PUFA
• 1.1.2 CLA的结构与功能
• 1.2 CLA的生物来源
• 1.2.1 CLA的存在
• 1.2.2 CLA在反刍物体内的合成
• 1.3 影响乳脂合成的因素
• 1.3.1 PUFA对乳脂合成的影响
• 1.3.2 反式脂肪酸降低乳脂合成的研究
• 1.4 添加油脂对奶中 CLA含量的影响
• 1.4.1 植物油对奶中CLA浓度的影响
• 1.4.2 膨化全脂大豆对奶中CLA浓度的影响
• 1.5 本课题的研究背景
• 1.5.1 干法挤压膨化对大豆营养品质及电镜结构变化的影响
• 1.5.2 添加膨化全脂大豆对高产奶牛血液和乳中尿素氮的影响
• 1.5.3 膨化全脂大豆对瘤胃干物质消化率及体外瘤胃发酵参数的影响
• 1.5.4 膨化全脂大豆对高产奶牛乳脂中PUFA含量的影响
• 1.5.5 饲喂膨化全脂大豆对奶牛组织中PUFA及CLA含量变化的影响
• 1.6 本研究的目的与内容
• 1.7 课题来源
• 2 膨化全脂大豆对瘤胃微生物氢化PUFA的影响研究
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 试验动物和设计
• 2.1.2 试验原料
• 2.1.3 仪器设备
• 2.1.4 不同区系微生物培养液的制备
• 2.1.5 体外培养
• 2.1.6 氨态氮的测定
• 2.1.7 VFA的测定
• 2.1.8 PUFA和 CLA的测定
• 2.1.9 统计分析
• 2.2 结果与分析
• 3-N的影响'>2.2.1 不同原料对NH₃-N的影响
• 3-N的影响'>2.2.2 不同区系瘤胃微生物对NH₃-N的影响
• 2.2.3 不同原料对 VFA的影响
• 2.2.4 不同区系瘤胃微生物对 VFA的影响
• 2.2.5 不同原料对 PUFA和 CLA的影响
• 2.2.6 不同区系的瘤胃微生物对PUFA和CLA的影响
• 3 添加膨化全脂大豆对奶牛肝脏和乳腺中△9-脱氢酶mRNA表达量的影响
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 试验动物与设计
• 3.1.2 日粮组成
• 3.1.3 饲养管理
• 3.1.4 仪器和试剂
• 3.1.5 奶牛肝脏和乳腺组织的采集
• 3.1.6 引物的设计与合成
• 3.1.7 总RNA的提取
• 3.1.8 cDNA的制备
• 3.1.9 适时荧光定量 PCR反应
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 RNA凝胶电泳
• 3.2.2 定量 PCR扩增曲线
• 3.2.3 溶解曲线
• 3.2.4 PCR产物电泳
• 3.2.5 Ct值及相对含量
• 4 讨论
• 4.1 膨化全脂大豆对瘤胃环境的影响
• 4.2 影响CLA合成的因素
• 4.2.1 PUFA对合成CLA的影响
• 4.2.2 影响CLA合成的其它因素
• 4.3 不同区系微生物在瘤胃内的作用
• 4.4 在分子水平上对 PUFA影响 CLA合成的研究
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文