论文题目: P210～（bcr/abl）激活鞘氨醇激酶信号通路的初步研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 内科血液病学
作者: 黄文荣
导师: 达万明,王立生
关键词: 慢性粒细胞白血病,融合蛋白,鞘氨醇激酶
文献来源: 中国人民解放军军医进修学院
发表年度: 2005
论文摘要: 慢性粒细胞白血病（chronic myelogcnous leukemia,CML）是一种以髓系细胞受累为主的多能造血干细胞的克隆性疾病。目前认为CML的主要分子发病基础为:位于9q34的abl基因与位于22q11的bcr基因相互易位形成bcr/abl融合基因,并编码具有很强蛋白酪氨酸激酶活性的P210bcr/abl融合蛋白,该蛋白通过多种信号通路抑制细胞凋亡而导致细胞转化。细胞膜鞘磷脂代谢的两种重要产物,即神经酰胺和1-磷酸鞘氨醇（S1P）的动态水平也是决定细胞凋亡和增殖的重要因素。神经酰胺促进细胞凋亡,抑制细胞增殖;而1-磷酸鞘氨醇则抑制细胞凋亡、刺激细胞生长增殖。鞘氨醇激酶-1（sphingosine kinase,SphK-1）作为S1P生物合成调节的关键限速酶,与细胞抗凋亡、增殖效应密切相关。本研究重点探讨了P210Bcr/Abl的抗凋亡效应是否与SphK-1/S1P信号通路有关,以便为CML的发病和治疗提供新的作用靶点。 首先我们利用RT-PCR证实了bcr/abl阳性的CML细胞表达SphK-1信号通路的相关分子。K562细胞和bcr/abl阳性的原代CML细胞均表达SphK-1和S1P受体mRNA。格列卫可以竞争性地结合到P210bcr/abl的三磷酸腺苷酸结合位点而特异性地抑制其酪氨酸激酶活性,为探讨CML细胞中P210bcr/abl和SphK-1信号通路的关系,我们利用格列卫处理bcr/abl阳性的K562细胞和CML原代细胞,然后通过32P-ATP掺入法测定细胞内SphK-1的酶活性。K562细胞在使用格列卫处理后SphK-1活性较对照下降（36.7～55.8）%,CML原代细胞在使用格列卫处理后SphK-1活性较对照下降（16.8～41.9）%,间接提示P210bcr/abl可能具有激活SphK-1的作用。 为进一步证实P210bcr/abl对SphK-1的激活作用,我们构建了携带b3a2型bcr/abl融合基因的逆转录病毒载体。将重组质粒转染包装细胞制备重组逆转录病毒感染Mo7e细胞,然后裂解、收集转染bcr/abl融合基因的Mo7e-P210细胞和转染空载体的Mo7e-pLXSN细胞的胞浆蛋白测定SphK-1酶活性,Mo7e-P210细胞的SphK-1活性比Mo7e-pLXSN细胞高（23～32）%,直接提示P210bcr/abl能激活SphK-1。为进一步确定P210bcr/abl对细胞SphK-1的激活作用,我们进一步使用Tet-off诱导表达系统观察了P210bcr/abl对SphK-1活性的影响。将bcr/abl融合基因亚克隆到
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 CML细胞SphK-1和S1P受体的表达及格列卫对其SphK-1活性的影响
第二部分 P210~(bcr／abl)激活SphK-1
第一章 P210~(bcr／abl)在造血细胞系Mo7e细胞中激活SphK-1
第二章 Tet-off诱导表达系统分析P210~(bcr／abl)激活SphK-1
第三部分 P210~(bcr／abl)激活SphK-1的信号通路研究
第四部分 优势表达SphK-1对K562细胞增殖的影响
论文结论
研究展望
参考文献
文献综述
附录(缩略词表)
个人简介
致谢
发布时间: 2005-07-15
参考文献
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标签：慢性粒细胞白血病论文; 融合蛋白论文; 鞘氨醇激酶论文;