（云南省保山市人民医院云南保山678000）
【摘要】目的：探讨间接免疫荧光法（IIF）检测的抗核抗体（ANA）阳性患者，使用免疫印迹法（IBT）检测抗核抗体谱（ANAs）的结果，观察二者结果的一致程度。方法：回顾性分析2015年1月至2016年10月在我院各临床科室就诊的558例ANA阳性患者，ANAs的结果，观察结果的一致程度。结果：ANA阳性的患者，ANAs的阳性率为58.96%，ANA的滴度为1:320，1:1000，1:3200，1:10000的患者，ANAs的阳性率分别为45.88%，77.72%，83.61%，100%。结论：ANA阳性的患者存在ANAs阴性的情况。而且ANAs的阳性率随着ANA滴度的增高而增高。
【关键词】抗核抗体；抗核抗体谱；间接免疫荧光法；免疫印迹法
【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2017）24-0365-02
抗核抗体（ANA）是自身免疫性疾病患者血清中最常出现的一类自身抗体，ANA检测对于自身免疫性疾病的诊断具有重要意义。病人血液中存在高效价自身抗体是自身免疫病的特点之一，也是临床诊断自身免疫性疾病的重要依据[1]。目前检测ANA的方法有间接免疫荧光法（IIF）和酶联免疫吸附试验法（ELISA）。ANA是指针对整个真核细胞所有抗原的自身抗体的总称，其实质包括很多特异性的自身抗体，但要确定患者血清中含何种抗体，需要通过已知抗原检测相应抗体，本文主要探讨ANA阳性时，患者的ANAs结果的一致性，及与ANA滴度的关系。
1.资料与方法
1.1一般资料
回顾性分析2015年1月至2016年10月在我院各临床科室就诊的558例ANA阳性患者的ANAs结果，其中男141例，女417例。年龄4岁到90岁，平均年龄（49.51±17.44）岁。
1.2试剂
抗核抗体（ANA）采用德国欧蒙公司生产的间接免疫荧光法（IIF）（马赛克）试剂盒，每个反应区含2种抗原复合基质；HEP-2细胞和猴肝组织。以1:320为起始稀释度，抗体滴度≥1:320判为阳性。抗核抗体谱（ANAs）采用德国欧蒙公司生产的免疫印迹法（IBT）试剂盒，包括抗RNP/Sm、抗Sm、抗SS-A、Ro-52、抗SS-B、抗Scl-70、抗J0-1、抗着丝点蛋白B、抗PCNA、抗dsDNA、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体、核糖体P蛋白以及抗线粒体M2抗体等共计15种IgG类抗体，肉眼观察，以出现明显的检测带为阳性。
1.3仪器
荧光显微镜：德国莱卡DM800型荧光显微镜。免疫印迹仪：德国欧蒙EUROBlotMaster。
1.4方法
清晨对患者采集空腹静脉血，一般采集3～5ml，静置半小时待血液完全凝固后，使用3500g离心力离心15分钟，分离血清，若当天无法及时进行检测的需放置于-20℃的冰箱中进行保存，检测时取出恢复至室温，混匀后进行检测，如有絮状沉淀或变浑浊，则离心后使用上清进行检测。
上述558例患者，首先采用间接免疫荧光法（IIF）进行ANA检测，起始稀释倍数为1:320，对1:320阳性的患者再依次使用1:1000、1:3200、1:10000的稀释倍数进行稀释后检测，对于1:10000仍然为阳性的患者标本不再进行稀释检测，每次实验均设置阴阳性对照。结果判读在暗室内采用莱卡DM800型荧光显微镜进行，若细胞或者组织内有特异性荧光则可判断为阳性。同时，对上述558例ANA阳性的患者使用免疫印迹法（IBT）进行ANAs检测，操作过程严格遵循试剂说明书进行，并对其结果进行判定。
1.5统计学分析
采用SPSS19.0统计软件，率的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差别有统计学意义。
2.结果
558例ANA阳性的患者中，ANA与ANAs结果，详见下表。
3.讨论
出现ANA与ANAs检测结果不一致，ANA阳性率高于ANAs阳性率。笔者认为应从两个方面来考虑。首先，间接免疫荧光法检测ANA使用的基质是HEP-2细胞和猴肝组织。使用上述细胞和组织检测人血清中的自身抗体，理论上来说只要是存在针对细胞内任何结构的抗体都能够检出，同时能够检出各种类型如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE型的自身抗体。而ANAs使用的是提纯的抗原包被在硝酸纤维素膜上检测相应的抗体，目前，ANAs包被的只有15种IgG类抗体，还存在不能提纯或者未被发现的自身抗体，而自身抗体主要为IgG型，但也有IgM、IgA、IgD和IgE型。其次，免疫自稳是免疫系统的三大功能之一，指机体识别和清除自身衰老残损的组织、细胞的能力，这是机体籍以维持正常内环境稳定的重要生理机制。在老年人中易出现低滴度的自身抗体，而老年人整个机体处于逐渐衰老的过程。
综上所述，ANA与ANAs检测结果不一致，ANA阳性率高于ANAs的阳性率，且ANA与ANAs的阳性符合率随着ANA滴度的增高而增高，与文献[2,3]报道一致，是由于检测方法的不同而造成的。是否与机体免疫系统的免疫自稳功能有关有待进一步研究。
【参考文献】
[1]许渊.抗核抗体谱在自身免疫性疾病中的临床运用[J]，检验医学与临床,2012,9（8）:945-946.
[2]郭大文，张英辉，单娜，等.抗核抗体核型与条带免疫抗体谱相关性分析[J].中华实用诊断与治疗杂志，2012,26（6）:560-562.
[3]高仕萍，杨文勇，等.抗核抗体和抗核抗体谱联合检测在自身免疫性疾病诊断中的临床应用价值[J].检验医学与临床，2014,11（2）:222-223.