濒危植物桃儿七（Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying）的遗传多样性研究

论文摘要

桃儿七（Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying；分类学上的同种异名有S. emodi（Wall）Ying，Podophyllum hexandrum Royle，P. emodi Wall；又名西藏鬼臼）是小檗科桃儿七属多年生草本植物，也是一种珍稀濒危药用植物。桃儿七主要生长在喜马拉雅及临近地区，分布于尼泊尔、不丹、印度、巴基斯坦、阿富汗与中国。在中国，主要分布在海拔2700到4500米的中国西南的两减、四川、云南，其他的省（自治区）如陕西、甘肃、青海、宁夏以及湖北亦有分布。据我们调查，桃儿七在四川省主要分布于阿坝州、甘孜州以及凉山州（仅木里县）等地。桃儿七是一种传统的民间药用植物，其根和根茎中的主要成分之一鬼臼毒素（podophyllotoxin）是人工合成的抗癌药物(VP16，依托泊苷；VM26，特尼泊苷)的前体。近年来由于人类砍伐等干扰活动加剧，桃儿七生境受到破坏，加上根茎可入药，采挖过量，致使种群数量迅速减少，已被国家列为三级保护植物。因此很有必要进行桃儿七保护遗传学研究，探讨它的濒危机制。 濒危物种保护遗传学的首要目标是评价遗传多样性水平和结构分布。有关桃儿七遗传多样性的研究，先前的工作主要集中在细胞学方面。本研究从DNA

论文目录

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• 表格目录
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 桃儿七居群遗传多样性的RAPD分析
• 摘要
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 DNA的提取与检测
• 1.2.1.1 DNA的提取
• 1.2.1.2 DNA的检测
• 1.2.2 RAPD扩增
• 1.2.3 RAPD扩增产物检测
• 1.2.4 数据的统计分析
• 2 结果与分析
• 2.1 DNA提取与检测
• 2.2 RAPD扩增结果
• 2.3 RAPD遗传多样性分析
• 2.4 居群遗传结构分析
• 2.5 遗传距离和聚类分析
• 3 讨论
• 3.1 RAPD实验的稳定性
• 3.2 桃儿七的遗传多样性
• 3.3 桃儿七居群的遗传结构
• 3.4 桃儿七遗传多样性的保护策略
• 参考文献
• 第二章 桃儿七居群遗传多样性的ISSR分析
• 摘要
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 DNA的提取
• 1.2.2 ISSR扩增
• 1.2.3 ISSR扩增产物检测
• 1.2.4 数据统计分析
• 2 结果与分析
• 2.1 ISSR扩增结果
• 2.2 ISSR遗传多样性分析
• 2.3 居群遗传结构分析
• 2.4 遗传距离和聚类分析
• 3 讨论
• 3.1 ISSR实验的稳定性
• 3.2 桃儿七的遗传多样性
• 3.3 桃儿七居群的遗传结构
• 3.4 桃儿七遗传多样性的保护策略
• 参考文献
• 第三章 桃儿七居群遗传多样性的AFLP分析
• 摘要
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 DNA的提取
• 1.2.2 AFLP扩增程序
• 1.2.3 AFLP扩增实验条件的优化
• 1.2.3.1 双酶切
• 1.2.3.2 连接
• 1.2.3.3 预扩增
• 1.2.3.4 选择性扩增实验条件的优化
• 1.2.3.5 选择性扩增
• 1.2.4 扩增产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
• 1.2.5 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 AFLP实验条件优化
• 2.1.1 模板浓度的影响
• 2.1.2 酶切
• 2.1.3 预扩增
• 2.1.4 选择性扩增实验体系的确立
• 2.1.4.1 选择性扩增条件的筛选
• 2.1.4.2 选择性扩增引物的筛选
• 2.2 AFLP遗传多样性分析
• 2.3 居群遗传结构的分析
• 2.4 遗传距离和聚类分析
• 3 讨论
• 3.1 AFLP实验条件的优化
• 3.2 桃儿七的遗传多样性
• 3.3 桃儿七居群的遗传结构
• 3.4 RAPD、ISOR和AFLP标记结果比较
• 3.5 桃儿七遗传多样性的保护策略与措施
• 3.5.1 实施原位保护策略
• 3.5.2 实施迁地保护策略
• 3.5.3 保护和重建桃儿七的适宜生境
• 3.5.4 采取其他替代性保护策略
• 参考文献
• 第四章 桃儿七鬼臼毒素含量变化研究
• 摘要
• 引言
• 1 材料、仪器与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 仪器与试剂
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 鬼臼毒素的提取
• 1.3.2 鬼臼毒素的定性鉴定
• 1.3.3 溶液配制
• 1.3.3.1 对照品溶液配制
• 1.3.3.2 供试品溶液配制
• 1.3.4 色谱条件的确定
• 1.3.5 鬼臼毒素含量的测定
• 1.3.5.1 标准曲线的制作
• 1.3.5.2 进样精密度试验
• 1.3.5.3 溶液稳定性试验
• 1.3.5.4 重复性试验
• 1.3.5.5 回收率试验
• 1.3.5.6 样品中鬼臼毒素含量的测定
• 1.3.6 土壤分析
• 1.3.6.1 土壤水分的测定
• 1.3.6.2 土壤pH值的测定
• 1.3.6.3 土壤养分含量的测定
• 1.3.7 数据统计分析
• 2 结果与分析
• 2.1 鬼臼毒素的定性鉴定
• 2.2 色谱条件
• 2.3 标准曲线、进样精密度、溶液稳定性、重复性及回收率试验
• 2.4 不同产地桃儿七样品鬼臼毒素的含量
• 2.5 不同生长季节桃儿七样品鬼臼毒素的含量
• 2.6 土壤因子对桃儿七鬼臼毒素含量的影响
• 3 讨论
• 3.1 桃儿七鬼臼毒素的提取及检测
• 3.2 不同产地和生长季节桃儿七鬼臼毒素含量的变化
• 3.3 桃儿七鬼臼毒素含量与土壤因子之间的关系
• 参考文献
• 结论
• 文献综述
• 第五章 植物遗传多样性及其保护研究进展
• 1 遗传多样性研究
• 1.1 遗传多样性研究的意义
• 1.2 遗传多样性与遗传结构
• 1.2.1 遗传多样性的概念
• 1.2.2 居群的遗传结构
• 1.3 影响物种遗传变异和遗传结构的因素
• 1.3.1 影响物种遗传变异大小的因素
• 1.3.2 影响物种遗传结构的因素
• 2 遗传多样性保护
• 2.1 保护遗传学研究概况
• 2.2 保护遗传学在濒危植物研究中的应用
• 2.2.1 濒危物种的遗传多样性
• 2.2.2 植物濒危的因素
• 2.2.3 保护单元的确定
• 2.2.4 保护策略的制定
• 2.3 遗传多样性研究方法及其进展
• 2.3.1 蛋白质标记
• 2.3.2 DNA标记
• 2.3.2.1 限制性片段长度多态性
• 2.3.2.2 随机扩增多态性DNA
• 2.3.2.3 扩增片段长度多态性
• 2.3.2.4 微卫星
• 2.3.2.5 微卫星间隔
• 2.3.2.6 DNA序列分析
• 3 桃儿七的研究进展
• 3.1 地理分布与系统发育
• 3.2 生物学特性
• 3.3 经济价值
• 3.4 遗传多样性分子标记研究
• 3.5 有效成分（鬼臼毒素）分离纯化与含量检测
• 参考文献
• 致谢
• 在读期间发表及待发表的论文情况