论文摘要
蚂蟥（或称水蛭）是环节动物门（Annelida）蛭纲（Hirudinea）的统称。蛭类作为传统中药在我国有着悠久的应用历史。主要是利用其产生的水蛭素等活性成分活血清淤,降低血液黏度。目前在欧美等西方国家主用利用欧洲医蛭Hirudo medicinalis Linnaeus,1758进行体外吸血治疗。其原理为欧洲医蛭唾腺产生的水蛭素（hirudin）能抗凝血。《中华人民共和国药典》2010版收录可以入药的水蛭有3种：宽体金线蛭Whitmania pigra （Whitman,1884）,尖细金线蛭Whitmania acranulata （Whitman,1886）和日本医蛭Hirudo nipponia （Whitman,1886）。宽体金线蛭是目前中药中应用最多的种类。但宽体金线蛭被许多分类学家认为是光润金线蛭Whitmania laevis （Barid,1869）的异名。而且金线蛭属的种类都是以软体动物为食,生活习性明显不同于吸食人或脊椎动物血的医蛭属。其是否分泌抗凝血的水蛭素尚未发现。因此对宽体金线蛭和光润金线蛭进行系统分类研究,弄清楚他们到底是同物异名或是不同的种不仅具有动物分类的理论意义,而且在指导中药准确用药和扩大药用动物资源方面都有重要意义。本文概述了我国蛭类分类研究历史及进展,并针对分类地位存在争议的宽体金线蛭Whitmania pigra （Whitman,1884）和光润金线蛭Whitmania laevis （Barid,1869）在陕西、内蒙、湖北、湖南等地采集了大量的金线蛭属标本。按照形态分类特征鉴定出了以上两种标本,同时也发现了部分疑似这两个种的标本。我们选取有代表性的标本采用数值分类学和分子系统学方法进行分类研究以探讨解决其同物异名问题和系统发生。数量分类学研究部分在所选标本的腹面选取7个标准点,获取6个数字测量特征值并转换为3个比例值,然后结合内部射精球和贮精囊面积比进行聚类分类。分子系统学部分以ND1部分序列及与其相邻的tRNA-leu部分序列、部分12SrRNA基因序列为分子标记,PCR扩增,测序后用Clustal x进行比对。在MEGA5中统计序列频率数据。在JModelTest中估算合适的碱基替换模型,利用MEGA5和PAUP4进行系统发育信号检验,利用NJ法、MP法构建系统发育树,以及在MrBayes软件中用贝叶斯法重建系统发育关系。本实验得到的结论如下：1、根据标本形态特征进行的数量分类学研究结果显示：Oka选择的分类特征在宽体金线蛭中较稳定,但还需要进一步补充鉴定光润金线蛭的分类特征。在本实验中所用的射精球与贮精囊比例并不是较为稳定的鉴定特征,推测这些特征可能易受个体营养等生理条件或外界环境的影响,仅可作为鉴定标本的辅助特征。2、以ND1以及12SrRNA所构建的NJ法、MP法和BI法系统发育树均分为两大枝,支持宽体金线蛭和光润金线蛭为两个不同的种；第七体节背面5环腹面4环的标本以及生殖孔不在环上的标本也跟光润金线蛭聚在一枝上,说明光润金线蛭形态表现出多态性。3、依据本研究所测金线蛭属标本12SrRNA序列和从NCBI下载的其他蛭类序列所做的系统发育树可以推测,金线蛭属与医蛭属有较近的亲源关系,可以推测非吸血性的金线蛭属可能是由吸血性的医蛭演化来的,因此其抗凝血的机制应该类似于医蛭。具体机制还有待研究验证。