聚羟基脂肪酸酯磁性微球和纳米颗粒的制备及运用

论文摘要

本文采用溶剂挥发法制备聚羟基脂肪酸酯磁性微球和磁性纳米颗粒,研究讨论磁性粒子/PHA的比率对粒径和内部结构的影响,进一步探索PHA磁性纳米颗粒成为新的药物载体的可行性。研究发现磁性粒子含量对罗丹明B的包封率有显著影响,但是对释放结果的不明显。这意味着PHA磁性纳米颗粒具有和纯的PHA材料同等的药物缓释效果。利用PHA颗粒表面结合蛋白（如PhaP）与疏水材料非特异性结合的特点,开发基于这些蛋白表面修饰PHA磁性纳米颗粒的研究平台,用于分离纯化蛋白和分离细胞等。实验证明利用PHA磁性纳米颗粒进行分离纯化的目的蛋白质比离心分离所纯化的蛋白含量更高。被PhaP-RGD修饰过的PHB磁性纳米颗粒可快速粘附到兔血管平滑肌细胞RaSMC和小鼠的成纤维细胞L929,在磁场下定向移动,并在指定位置继续生长。本论文证明了用PHA颗粒表面结合蛋白融合表达蛋白进行表面修饰PHA磁性纳米颗粒的可行性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 前言
• 1.1 磁性高分子微球和纳米颗粒
• 1.1.1 概述
• 1.1.2 磁性高分子微球或纳米颗粒的制备
• 1.1.3 磁性高分子微球和纳米颗粒的应用
• 1.1.4 磁性高分子微球和磁性纳米颗粒在医学领域的应用
• 1.1.5 磁性高分子微球和纳米颗粒在生物技术中的应用
• 1.2 生物材料PHA的研究概况
• 1.3 PHA颗粒表面结合蛋白
• 1.3.1 PHA颗粒表面结合蛋白PhaP的结构与功能
• 1.3.2 PHA颗粒表面结合蛋白PhaP的运用
• 1.3.3 其他PHA颗粒表面结合蛋白的概述
• 1.4 选题的目的及其意义
• 第二章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌种
• 2.1.2 质粒
• 2.1.3 常见试剂和材料
• 2.1.4 分子量标准物
• 2.1.5 常用仪器设备
• 2.1.6 常用培养基的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 菌种保存方法
• 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
• 2.2.3 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
• 2.2.4 细菌总蛋白裂解液的制备
• 2.2.5 蛋白质含量的测定
• 2.2.6 PHA磁性微球的制备
• 2.2.7 PHA磁性纳米颗粒的制备
• 2.2.8 磁吸分离实验
• 2.2.9 扫描电镜观察
• 2.2.10 透射电镜观察
• 2.2.11 粒径大小测量
• 2.2.12 包封率计算
• 2.2.13 胞外缓释和RB释放率
• 2.2.14 细胞培养
• 2.2.15 荧光素双醋酸酯染色
• 2.2.16 PHA磁性纳米颗粒粘附细胞测试
• 2.2.17 PHA磁性纳米颗粒固定细胞测试
• 2.2.18 PHA磁性纳米颗粒分离细胞
• 第三章 PHA磁性微球和纳米颗粒的制备
• 3.1 磁性粒子表面疏水化改性
• 3.2 粒径大小分布
• 3O₄磁性粒子含量'>3.3 TGA分析Fe₃O₄磁性粒子含量
• 3.4 电子显微镜观察PHB微球和纳米颗粒表面结构
• 3.5 TEM观察PHB磁性纳米颗粒内部结构
• 3.6 PHBV和PHBHHx磁性纳米颗粒的内部结构
• 3.7 讨论与小结
• 第四章 PHA磁性纳米颗粒作为缓释药物载体的研究
• 4.1 负载RB的PHA磁性微球和磁性纳米颗粒的制备
• 4.2 PHA磁性微球和磁性纳米颗粒中RB的包封率
• 4.3 PHA磁性纳米颗粒的缓释
• 4.4 讨论与小结
• 第五章 利用PHA磁性颗粒和PhaP融合标签亲和纯化蛋白
• 5.1 融合蛋白的大肠杆菌表达
• 5.2 PhaP和PhaR与PHB磁性颗粒的体外结合
• 5.3 PhaP与PHB磁性颗粒的复合体在磁场中的移动
• 5.4 利用PHB磁性纳米颗粒纯化PhaP标签的融合蛋白
• 5.5 利用PHBV及PHBHHx磁性纳米颗粒纯化PhaP标签的融合蛋白
• 5.6 讨论和小结
• 第六章 利用PhaP融合蛋白修饰的PHA磁性纳米颗粒固定和分离细胞
• 6.1 在大肠杆菌中进行融合蛋白PhaP-RGD的表达和纯化
• 6.2 PhaP-RGD修饰PHB磁性纳米颗粒
• 6.3 PHB磁性纳米颗粒粘附细胞测试
• 6.4 PHB磁性纳米颗粒固定细胞测试
• 6.5 PHB磁性纳米颗粒分离细胞
• 6.6 讨论与小结
• 第七章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历及在学期间发表论文与研究成果