论文摘要
目的:本实验研究拟探讨自噬激活或抑制对人脐静脉内皮细胞增殖和血管形成的影响及其可能的作用机制,为治疗深静脉血栓形成提供理论依据。方法:人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）加入不同浓度雷帕霉素（0.01μg/L、0.1μg/L、1μg/L、10μg/L）和不同浓度的3-MA（1.25mmol/L、2.5mmol/L、5.0mmol/、10.0mmol/L）,分别培养24小时。1、MTT法观察其增殖能力的变化,2、FCM检测细胞凋亡情况,3、Western blot检测细胞内组织蛋白酶、LC3-Ⅱ表达的变化,4、ELISA检测上清液中VEGF、bFGF表达变化,5、电镜观察细胞形态及超微结构。均数以（±s）表示,采用单因素方差分析比较各组均数,（P<0.05）有统计学意义,（P>0.05）无统计学意义。结果:1、雷帕霉素浓度在0.01μg/L时,对HUVECs增殖的抑制作用不明显,浓度在0.1μg/L及以上抑制作用显著,（P<0.05）;3-MA浓度在1.25mmol/L时对HUVECs的增殖促进作用不明显,浓度在2.5mmol/L及以上时促进作用明显,（P<0.05）。2、FCM检测结果表明,2.5mmol/L及以上3-MA组明显抑制HUVECs凋亡,而1.25mol/L组作用不明显;0.1μg/L及以上雷帕霉素组促进HUVECs凋亡作用显著,与对照组比较有统计学意义,（P<0.05）。3、雷帕霉素各浓度组LC3-Ⅱ表达呈明显升高的趋势,0.1μg/L及以上雷帕霉素组组织蛋白酶B的表达呈明显升高的趋势;3-MA各浓度组LC3-Ⅱ表达呈明显降低的趋势,2.5mmol/L及以上3-MA组组织蛋白酶B表达呈明显降低的趋势,（P<0.05）。4、2.5mmol/L及以上3-MA浓度组VEGF表达较对照组明显升高,（P<0.05）;0.1μg/L及以上雷帕霉素组VEGF表达明显低于对照组,与对照组比较（P<0.05）;3-MA各浓度组bFGF的表达较对照组明显升高;0.01μg/L雷帕霉素组不影响bFGF的表达,0.1μg/L及以上雷帕霉素组bFGF表达明显低于对照组,（P<0.05）。5、透射电子显微镜下雷帕霉素组HUVECs可见线粒体肿胀、溶酶体增多、自噬囊泡形成等细胞超微结构变化,3-MA组胞浆中没有明显的独立双层膜结构自噬囊泡出现,也没有发现自噬溶酶体,但可见部分线粒体发生肿胀,变圆,个别细胞空泡化,基质变浅,嵴变少,出现纵向嵴和同心圆嵴。结论:自噬激活能抑制HUVECs的增殖、促进其凋亡;一定程度的自噬抑制能促进HUVECs增殖,调控自噬水平可以影响人脐静脉内皮细胞LC3-Ⅱ、cathepsinB、VEGF、bFGF的表达水平。自噬诱导HUVECs凋亡的机制可能是溶酶体组织蛋白酶途径得以发挥作用的。
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