上皮性卵巢癌中微卫星不稳定性和错配修复基因表达的研究

论文摘要

目的：卵巢癌是死亡率最高的生殖系统肿瘤，其中90％为上皮性卵巢癌，其发生发展是一个多因素参与的多阶段、多步骤的演变过程。卵巢癌是成年妇女中最常见的具有遗传因素的肿瘤之一，也是HNPCC最常见的伴发肿瘤之一。本课题通过检测新鲜卵巢癌组织标本中的微卫星不稳定性及错配修复基因mRNA的表达，来了解卵巢癌中是否存在基因组不稳定性及错配修复基因的失活，并了解微卫星不稳定性与错配修复基因表达与卵巢癌的分期，分级，分型的关系。同时通过检测错配修复基因启动子区域的甲基化从DNA水平来探讨卵巢癌中错配修复基因失活的机制，有助于阐明卵巢癌的发生机制。第一部分上皮性卵巢癌和微卫星不稳定性方法：收集2004年6月-2005年1月复旦大学附属肿瘤医院和附属妇产科医院的90例上皮性卵巢癌新鲜切除标本及同一患者的5ml术前外周静脉血作为判断微卫星不稳定性的正常对照，并同时收集20例同期手术的良性卵巢囊肿患者的卵巢病灶新鲜组织和5ml术前外周静脉血作为对照组：分别抽提病例组和对照组组织和外周血基因组DNA，选取国际合作HNPCC小组推荐的五个检测位点是：BAT25、BAT26、D2S123、D5S346、D17S250，进行毛细管凝胶电泳，分析软件自动分析得出结果，用SPSS11.0统计软件分析，P＜0.05提示差别有统计学意义。结果：1)：病例组中和对照组MSI-H的发生率为20％、0，差异具有显著。（P＜0.05）；2)：上皮性卵巢癌中MSI-H的发生率与分期显著显著相关（P=0.003），Ⅰ期发生率较高，为：45％；3)：上皮性卵巢癌中MSI-H的发生率在低分化的肿瘤、粘液性腺癌、和透明细胞癌中的发生率较其他类型的卵巢癌高，但是MSI—H的发生率与患者年龄、肿瘤的分化、病理分型没有显著相关性（P＞0.05）。结论：微卫星不稳定性在上皮性卵巢癌中是一重要现象；在不同亚型的上皮性卵巢癌中的作用不同：多发生于疾病的早期，在上皮性卵巢癌的发病中起一定的作用，并推动疾病的恶变进程。第二部分上皮性卵巢癌中错配修复基因表达和微卫星不稳定性方法：收集2004年6月-2005年1月复旦大学附属肿瘤医院和附属妇产科医院的90例上皮性卵巢癌新鲜切除标本并同时收集20例同期手术的良性卵巢囊肿患者的卵巢病灶新鲜组织做为对照，提取mRNA；用实时荧光定量PCR仪相对定量分析对照组和病例组中hMLH1、hMSH2、hMSH3、hMSH6、hPMS1、hPMS2的表达；结果用SPSS11.0统计软件分析，P＜0.05提示差别有统计学意义。结果：1)：hMLH1的mRNA的表达在良性囊肿的表达明显高于上皮性卵巢癌组织（P＜0.05）；在微卫星稳定性的病例中明显高于微卫星不稳定性的病例（P＜0.05）；在分化低的病例中明显低于分化高的病例（P＜0.05）：与肿瘤的分期、分型没有显著性差异（P＞0.05）。2)：hMSH2的mRNA表达在良性囊肿和肿瘤组织没有显著性差异（P=0.987）；其表达与肿瘤的分期、分级、分型及微卫星状态没有显著性差异（P＞0.05）。3)：hMSH3、hMSH6、hPMS1、hPMS2的mRNA的表达在良性囊肿和肿瘤组织有显著性差异（P＜0.05）；其表达与肿瘤的分期、分级、分型及微卫星状念没有显著性差异（P＞0.05）。结论：人体错配修复系统中，hMLH1基因对DNA碱基错配修复具有重要的作用；错配修复基因表达的缺失尤其是hMLH1基因在上皮性卵巢癌的发生中起一定的作用：且促进疾病的恶性演进：并导致上皮性卵巢癌中的微卫星不稳定性。第三部分上皮性卵巢癌中hMLH1基因表达缺失和启动子甲基化方法：用甲基化特异PCR（MSP）的方法分析病例组和对照组中hMLH1基因启动子甲基化的状态，并分析病例组中hMLH1基因启动子甲基化的状态与肿瘤的临床病理特征和微卫星状态的关系。结果用SPSS11.0统计软件分析，P＜0.05提示差别有统计学意义。结果：1)：良性卵巢囊肿，上皮性卵巢癌中hMLH1基因启动子区甲基化的发生率分别为0、16.6％，差异有统计学意义（P＜0.05）；2)：hMLH1基因启动予区甲基化的发生率在不同分期、分级、及分型的上皮性卵巢癌中没有显著性差异（P＞0.05）；3)：hMLH1基因启动子区甲基化的发生与上皮性卵巢癌中微卫星不稳定性的发生及hMLH1基因的表达缺失显著相关（P＜0.05）。结论：hMLH1基因启动子区甲基化是上皮性卵巢癌中hMLHl基因的表达缺失的主要机制，也可能是导致上皮性卵巢癌中微卫星不稳定性的主要机制。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 参考文献
• 第一部分 上皮性卵巢癌中微卫星不稳定性的研究
• 1.材料和方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 4.参考文献
• 第二部分 上皮性卵巢癌中错配修复基因表达的研究
• 1.材料和方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 4.参考文献
• 第三部分 上皮性卵巢癌中hMLH1基因启动子甲基化的研究
• 1.材料和方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 4.参考文献
• 全文小结
• 英文缩略词表
• 综述
• 发表论文清单
• 致谢