柴胡疏肝散有效成分含量测定及组方关系研究

论文摘要

柴胡疏肝散出自于张介宾《景岳全书·古方八阵·散阵》,由君药柴胡,臣药香附、川芎,佐药陈皮、枳壳、芍药,使药甘草组成,是疏肝解郁的良方。该方疗效确切,临床应用广泛。其有效成份为皂苷类、黄酮类、萜类及酚酸类等。本课题以柴胡疏肝散为研究对象,通过对柴胡疏肝散的提取条件、多种指标性成分的质量评价进行研究,建立柴胡疏肝散多种指标性成分的含量测定分析方法,为柴胡疏肝散的质量控制提供参考。考察了配伍关系对多种有效成分的影响,探讨该方配伍应用的科学性,为其配伍机理的进一步深入研究奠定基础。1柴胡疏肝散主要有效成分的含量测定建立高效液相色谱法及紫外-可见分光光度法测定该复方中多种有效成分含量测定的分析方法。以柴胡皂苷a、芍药苷、阿魏酸、橙皮苷的含量为考察指标,采用L9（34）正交设计,优化提取工艺。结果如下:1.1通过正交设计法确定的最佳提取条件为:加入10倍量80%的乙醇,回流提取2次,每次90 min。1.2采用HPLC法测定柴胡疏肝散中柴胡皂苷a、芍药苷、阿魏酸及橙皮苷指标性成分的含量。其色谱条件为:Hypersil BDS C18 （4.6mm×250 mm,10μm）色谱柱;柴胡皂苷a流动相为水-乙腈（57: 43）,其他成分流动相为甲醇-0.5%冰醋酸（40: 60）洗脱;流速0.8 ml·min-1;柱温30℃;检测波长范围200-400 nm,分段变波长测定。结果显示:4种指标性成分在15 min内实现良好分离,柴胡皂苷a、芍药苷、阿魏酸和橙皮苷的线性范围分别为:22.7167μg·ml-1（r=0.999 9）,15.9254μg·ml-（1r=0.999 7）,6.30202μg·ml-（1r=0.9995）,22.1353μg·ml-1（r=0.999 3）,平均回收率分别为97.6%,97.4%,96.4%,98.9%,RSD分别为2.07%,1.33%,1.15%,0.71%。该方法简单快捷,准确可靠。1.3以正丁醇萃取方法富集总皂苷,利用香草醛-高氯酸显色,柴胡皂苷a为对照品,紫外-可见分光光度法测定总皂苷,检测波长327 nm;采用NaNO2、Al（NO3）3、NaOH显色,芦丁作为对照品,可见分光光度法测定总黄酮,检测波长508 nm;采用可见分光光度法测定总酚酸的含量,以没食子酸为对照品,0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe（CN）6] （1:0.9）混合液为显色剂,在725 nm波长处进行测定。结果显示:总皂苷的线性回归方程为:Y=0.1503X+0.0393,r=0.9995,在1.718.00μg·ml-1范围内呈良好的线性关系。平均回收率为97.0%,RSD为1.91%。测得柴胡疏肝散中总皂苷平均含量为0.81%,RSD为1.45%;总黄酮的线性回归方程为:Y=11.89X-0.0395,r=0.9996,在15.245.6μg·ml-1范围内吸光度与浓度呈良好的线性关系,平均回收率为96.6%,RSD为1.56%。柴胡疏肝散提取液中总黄酮的平均含量为0.58%,RSD为1.27%;总酚酸的线性回归方程为Y=0.1146X-0.0374,r=0.9997。在1.594.79μg·ml-1范围内程良好的线性关系,平均回收率为96.8%,RSD为1.53%,总酚酸的平均含量为0.68%,RSD为1.47%。2合煎与分煎化学成分及含量的变化采用HPLC法测定复方合煎液与分煎液中四种指标性成分的含量,比较这四种指标性成分含量变化及HPLC色谱图的差异。结果显示:复方合煎液中柴胡皂苷a、芍药苷、阿魏酸的含量>复方分煎液>单味药材的提取液。复方合煎液中柴胡皂苷a、芍药苷及阿魏酸的平均含量分别为3.737 mg·g-1, 6.076 mg·g-1, 0.633 mg·g-1（以复方中各单味药计）,比复方分煎液中柴胡皂苷a、芍药苷、阿魏酸的含量高17.84%、10.82%、10.97%;而复方合煎液中橙皮苷的平均含量比复方分煎液低15.85%。合煎液与分煎液的HPLC图谱总体图形图貌基本一致。3柴胡疏肝散不同配伍对柴胡皂苷a溶出量的影响研究不同配伍对君药柴胡中主要有效成分柴胡皂苷a含量的影响。以传统的君、臣、佐、使为因素,采用L8（27）正交表进行组合研究配伍对柴胡皂苷a溶出率的影响,并对结果进行统计分析。在此基础上,按有效部位提取量的高低将配伍组合分为四组,采用单因素方差分析,比较柴胡疏肝散不同药味配伍对柴胡皂苷a溶出率的影响。结果显示:臣药、佐药、使药对柴胡皂苷a的溶出率的影响均有统计学意义。全方组中柴胡皂苷a的溶出率最高。其中含有佐药枳壳和使药甘草配伍组中柴胡皂苷a的溶出较高,而含有佐药白芍、臣药香附、川芎的配伍组,柴胡皂苷a的溶出较低。综上所述:经正交设计试验优选了最佳提取条件,在优选的提取条件下,所得的有效成分含量较高。建立了相对全面的柴胡疏肝散多种有效成分的含量测定方法。复方合煎液有效成分的含量发生了变化。柴胡疏肝散不同配伍时柴胡皂苷a的溶出具有显著性差异。

论文目录

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• 缩略词表
• 研究论文 柴胡疏肝散有效成分含量测定及组方关系研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 柴胡疏肝散的研究进展
• 致谢
• 个人简历