结核杆菌ESAT-6抗原多表位DNA疫苗的制备及其免疫效果的初步研究

论文摘要

第一部分结核杆菌ESAT-6抗原多表位DNA疫苗的构建与体外表达的鉴定目的:构建含3个结核杆菌ESAT-6抗原T细胞表位及Flt3配体基因的重组质粒,并使其在大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）中表达。方法:用计算机软件预测结核杆菌ESAT-6抗原的T细胞表位谱,选取3个T细胞表位,并以Ala-Ala-Tyr（AAY）序列作为接头,合成全基因序列,定向克隆入真核双表达载体pIRES及质粒pIRES-FL。在酶切分析与序列测定后,用PEI转染至GMCs细胞,并行Western blot鉴定其体外表达。结果:核酸序列测定证实重组质粒构建正确,Westernblot证实该重组质粒能在体外GMCs细胞中表达融合蛋白。结论:成功构建了结核杆菌ESAT-6抗原多表位基因重组质粒。第二部分结核杆菌ESAT-6抗原多表位DNA疫苗诱导C57BL/6小鼠免疫应答的初步研究目的:研究结核杆菌ESAT-6抗原多表位基因及FL胞外段共表达质粒对小鼠的免疫功能的影响。方法:将pIRES-TH、pIRES-TH-FL重组质粒免疫小鼠,检测小鼠体内特异性淋巴细胞增殖、Th1与Th2型细胞因子（IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10）分泌以及小鼠血清ESAT-6特异性IgG2a、IgG1型抗体的水平。结果:经pIRES-TH质粒免疫的小鼠Th1型应答水平上调,Th2型应答水平下降。联合FL基因的pIRES-TH-FL重组DNA疫苗免疫效果高于单纯ESAT-6表位的DNA疫苗。结论:结核杆菌ESAT-6表位及FL胞外段共表达质粒能够提高小鼠体内的细胞免疫功能。

论文目录

• 英文缩略词
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• 研究背景
• 第一部分 结核杆菌ESAT-6抗原多表位DNA疫苗的构建与体外表达的鉴定
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 结核杆菌ESAT-6抗原多表位DNA疫苗诱导C57BL/6小鼠免疫应答的初步研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 结论
• 致谢
• 附录一 综述 结核分枝杆菌保护性抗原的研究进展
• 附录二 硕士在读期间已发表和待发表的学术论文
• 附录三 文章扫描件