冠心舒通胶囊对抗动脉粥样硬化可能机制的动物实验研究

论文摘要

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是动脉壁上聚集了许多脂质颗粒、胞外基质纤维和炎症细胞及炎症因子的一种慢性炎症性疾病，是引起冠心病、某些脑血管病的病理基础，随着饮食结构、生活习惯的变化，越来越多的年轻人过早的出现了动脉粥样硬化的病变。在祖国医学的理论中，可将动脉粥样硬化病变归结于“痰瘀互结”，随着抗AS的药物研究的不断的深入，中医药抗AS取得了明确的效果，其优点在于其调理能力强，而副作用又较小，不会产生药物依赖性，在1)调节血脂代谢的环节，2)保护血管内皮细胞功能方面，3)抗炎症反应的作用上，4)以及稳定斑块等方面发挥着突出的作用。目前存在的问题是，中药抗动脉粥样硬化的动物实验虽多，但是缺乏规范化，缺乏在深层机制层面的阐述研究。冠心舒通胶囊主要用于口服治疗冠心病心绞痛，在临床应用中取得了良好的效果，但是其抗AS的作用和相关机制还未曾研究。为了制备动脉粥样硬化模型，本课题拟采用高胆固醇饲料喂养Wistar大鼠加注维生素D1，以及高脂饲料喂养载脂蛋白E基因敲除小鼠（ApoE-/-小鼠），通过灌服冠心舒通胶囊，分别检测其血脂及血液流变学的指标，血管内皮功能和炎症反应的指标，以及AS斑块稳定性及大小，来初步阐述其在体内预防和治疗动脉粥样硬化的途径。实验一研究方法：32只雄性Wistar大鼠，首先适应性喂养1周，后随机平均分为正常组（NC）、正常+冠心疏通胶囊药物组（NG）、高脂组（HG）、高脂+冠心舒通胶囊药物组（GG），共4组，每组8只。正常组及正常+药物组给予普通饲料，高脂组及高脂+药物组给予高脂饲料，给药组灌胃给予冠心舒通胶囊，按1.8g/kg，1次/d，连续8周；实验结束后，将大鼠麻醉，直视下心脏穿刺取血,一部分立即送临床检验科检测血脂两项：TC，TG；以及血液流变学指标（全血粘度，红细胞聚集指数，屈服应力），另一部分于实验室内ELESIA法测定血LDL、NO、ET-1、MDA等指标，Western-blot法测定血管组织VCAM-1表达情况，胸主动脉中段冰冻切片，HE染色查看血管大体病变情况。研究结果：4组Wistar大鼠喂养8周后，HG组大鼠血管组织在光学显微镜下观察，出现明显病变，内皮增厚、内皮下组织结构明显异常，出现空泡，血管平滑肌层破坏严重，与NC组差异明显。而GG组的大鼠血管病变则较轻，血液标本检验显示冠心舒通胶囊胶囊可强有力对抗模型大鼠TC和TG的升高、和LDL的上升（P＜0.05），而对正常喂养大鼠的血脂则无明显影响；并可通过降低血液粘稠度，增加红细胞的变形能力，降低红细胞的聚集指数等（P＜0.05）从而改善血液流变学的各项指标，血浆NO与ET-1，以及MDA检测HG组与GG组差异有统计学意义（P＜0.05）。蛋白质印迹法检测血管组织VCAM-1的表达，可以看出冠心舒通胶囊有效抑制了AS血管的炎症反应。实验二研究方法：30只8周龄ApoE-/-小鼠适应性喂养，12weeks后，（高脂饲料配方为：15%脂肪，0.25%胆固醇，84.75%基础饲料）分为单纯高脂喂养组（HF），高脂喂养+冠心舒通胶囊高剂量（1.8g/Kg/天）灌服组（HH），高脂喂养+冠心舒通胶囊低剂量（0.6g/Kg/天）灌服组（HL）。12周后取各组ApoE小鼠主动脉中段分别行油红染色查看大体病变情况；Immunofluorescencemethod染色检测MMP-9于血管的表达情况。研究结果：3组ApoE-/-小鼠12w后，油红染色标本，AS斑块着红色，与模型组相比，主动脉AS斑块冠心舒通胶囊组面积明显减小（P＜0.05），MMP-9表达受到抑制（P＜0.05），且HH组斑块面积比例低于HL组，HH组荧光强度弱于HL组。结论：冠心舒通胶囊可以通过降低血脂、改善血液流变学指标、抑制血管炎症反应、保护血管内皮功能、使AS斑块不易破碎等方面、多靶点作用来预防或者治疗AS病变。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 文献回顾
• 实验一 冠心舒通胶囊干预高脂喂养大鼠早期动脉粥样硬化模型实验
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 . 讨论
• 实验二 冠心舒通胶囊对 ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块内 MMP-9 表达的影响
• 1 . 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢