胸腺生成素Ⅱ对试验性变态反应性脑脊髓炎大鼠TNFR和IL-10表达的影响

胸腺生成素Ⅱ对试验性变态反应性脑脊髓炎大鼠TNFR和IL-10表达的影响

论文摘要

目的:多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种常见的以白质炎症反应、脱髓鞘及轴索变性坏死为特征的中枢神经系统慢性疾病。具有反复发作,进行性加重的特点。目前认为其主要发病机制为针对自身神经系统髓鞘的特异性T淋巴细胞激活, TH1免疫细胞分泌的一系列炎性细胞因子如TNF-α,IFN-γ,IL-1,IL-2等,同时TH2淋巴细胞分泌的抗炎性细胞因子如IL-4,IL-10等活性下降,TH1与TH2细胞比例失调,激活的炎性细胞及细胞因子进入中枢神经系统引起一系列损伤。国内外学者多注重免疫抑制药物的开发和研究,由于此类药物的种种副作用及引起的一系列并发症,有必要从其他途径寻找有效地治疗方法。胸腺是免疫系统中重要的中枢免疫器官,负责T细胞的分化和成熟.可分泌数十种胸腺素以调节其免疫功能的作用,胸腺素类制剂目前己成为人们十分关注的免疫调节剂。胸腺生成素Ⅱ(thymopoietinⅡ)是从人体胸腺激素中分离出来的一种单一多肽化合物,有49个氨基酸组成,研究证实胸腺生成素Ⅱ能诱导T细胞亚群的分化和成熟,减少自身抗体的产生,调节CD4+/CD8+细胞比例转向正常,使免疫系统恢复正常。胸腺五肽是人工合成的五肽,其氨基酸顺序和结构与胸腺生成素的32-36位氨基酸相同,是胸腺生成素Ⅱ的重要活性部分,本课题就是MS的经典模型-实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)模型基础上,应用不同剂量的胸腺五肽进行治疗,通过对实验动物发病率,行为学改变,脑与脊髓病理变化,及脑与脊髓中TNFR1,TNFR2及IL-10表达的研究,对胸腺生成素对EAE的治疗作用及机制进行探讨,并与传统激素治疗方法进行对比,从而为临床实践提供理论基础。方法:1动物分组:将130只6-8周龄雌性Wistar大鼠,体重180-200克,随机分为正常对照组10只,EAE模型组,小剂量治疗组(0.05mg/kg),大剂量治疗组(0.25mg/kg),氟美松治疗组(5mg/kg)各30只,再分别将EAE模型组,小剂量治疗组,大剂量治疗组,氟美松治疗组随机分为7天,14天,17天,21天,28天五个小组,每小组6只。2模型制备:将新鲜豚鼠全脊髓制成匀浆,加上完全福氏佐剂(Complete Freund Adjuvant,CFA),佐剂中所含卡介苗4mg/ml,经过乳化后按0.4ml/只分别于大鼠四只足垫皮下注射。药物治疗组于模型制备第一天起给与相应剂量腹腔注射,每天一次。3神经功能评分:于动物免疫当日及免疫后每天对动物体重变化、精神状态、活动情况进行观察,并对动物进行神经功能评分,采用Hooper的7分评分标准:0分;正常;1分:被毛不光整,尾部无力;2分;尾部瘫痪;3分:尾部瘫痪+上肢无力;4分:为不瘫痪+后肢部分瘫痪;5分:后肢完全瘫痪;6分:四肢瘫痪;7分:濒死状态或死亡。每日分上下午两次对动物进行观察评分。4组织病理学观察:分别于免疫后第7、14、17、21、28天,在动物麻醉状态下,快速取大脑侧脑室周围及颈、胸、腰膨大处组织,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,组织切片,HE染色,光学显微镜下观察炎症细胞浸润情况。5 RT-PCR法测定脑与脊髓中TNFR1、TNFR2、IL-10mRNA表达量:将试验动物于免疫后第7、14、17、21、28天时麻醉后,快速取大脑侧脑室周围白质及颈、胸、腰膨大处组织,至液氮中保存,trizol一步法提取总RNA,采用随机引物法进行逆转录反应,最后进行扩增获得目的基因TNFR1、TNFR2、IL-10,以相应标本中β-acitn的表达量作为内对照进行半定量检测。最后用凝胶图像分析系统分析结果。结果:1动物发病率观察:EAE模型组高于氟美松治疗组和胸腺生成素治疗组,均有统计学意义(P<0.05)。胸腺生成素治疗组高于氟美松治疗组,有统计学意义(P<0.05)。大小剂量组之间的发病率没有统计学意义(P>0.05)。2行为学观察2.1免疫后7天,14天内:在动物发病潜伏期和发病初期时对神经功能评分,各组之间无明显差别。2.2免疫后17天,21天,28天内:在动物发病高峰期和复发期时分别对神经功能评分,氟美松治疗组低于胸腺生成素治疗组(P<0.05),氟美松治疗组和胸腺生成素治疗组均低于EAE模型组(P<0.05),大小剂量组之间无明显差异(P>0.05)。三个时期均为此结果。3复发情况观察:对于28天组动物进行疾病复发的观察,EAE模型组>大剂量治疗组>小剂量治疗组>氟美松治疗组,但统计学上无差别(P>0.05)。4组织病理学观察: EAE模型组炎症细胞浸润形成的血管套袖数目高于治疗组,有统计学意义(P<0.05)。氟美松治疗组高于小剂量治疗组,有统计学意义(P<0.05)。氟美松治疗组>大剂量治疗组>小剂量治疗组,但氟美松治疗组与大剂量治疗组,大小剂量治疗组之间均无统计学意义(P>0.05)。5 TNFR1、TNFR2、IL-10mRNA表达量:5.1 TNFR1: TNFR1在发病初期即开始升高,随着病程进展呈增高趋势,至恢复期又开始回降,其含量与疾病活动度有关,胸腺生成素治疗组在发病高峰期和恢复期水平均低于EAE模型组和氟美松治疗组,且有统计学意义(P<0.05),大剂量治疗组与小剂量治疗组之间、EAE模型组与氟美松治疗组之间均无明显差异(P>0.05)。5.2 TNFR2: TNFR2在发病高峰期才开始升高,至恢复期达峰值,复发期水平回降,其含量与疾病活动度有关,胸腺生成素治疗组在发病高峰期和恢复期水平均高于EAE模型组和氟美松治疗组,且有统计学意义(P<0.05),大剂量治疗组与小剂量治疗组之间、EAE模型组与氟美松治疗组之间均无明显差异(P>0.05)。5.3 IL-10: IL-10在发病初期即开始升高,至高峰期达峰值,恢复期水平回降,其含量与疾病活动度有关,胸腺生成素治疗组在发病高峰期和恢复期水平均高于EAE模型组和氟美松治疗组,但无统计学意义,大剂量治疗组与小剂量治疗组之间、EAE模型组与氟美松治疗组之间均无明显差异(P>0.05)。6脑与脊髓中病理与细胞因子表达比较6.1组织病理同一组别内脊髓炎症细胞浸润形成的血管袖套数目多于脑,但统计学无意义(P<0.05)。6.2细胞因子表达量TNFR1、TNFR2、IL-10三种细胞因子在同一组别内脑组织与脊髓炎症细胞浸润形成的血管袖套数目无明显差别(P<0.05)结论:1 EAE大鼠脑组织与脊髓中TNFR1、TNFR2、IL-10mRNA表达量与疾病活动度有关。2胸腺生成素Ⅱ可以减少EAE大鼠的发病率,减轻脑组织与脊髓炎症细胞浸润的程度和神经功能损伤程度3胸腺生成素Ⅱ与氟美松相比较,在动物实验中氟美松能有效的减少EAE的复发率和减轻复发程度,而且发病初期在减轻炎症细胞浸润的程度方面优于胸腺生成素Ⅱ,在疾病后期胸腺生成素减轻动物的病理损害上优于氟美松,并能够通过调节炎性及抗炎性因子来促进病情的缓解和恢复,且较氟美松副作用少。4胸腺生成素Ⅱ可以调节免疫功能,抑制EAE大鼠中炎性介质的表达,减轻炎性损伤。5 IL-10、TNFR1、TNFR2的变化与多发性硬化的活动度有关。在发病初期至高峰期, TNF通过与TNFR1结合发挥生物效应介导炎症反应。IL-10升高,TNFR2表达水平逐渐上升,炎症缓解进入恢复期。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 研究论文 胸腺生成素Ⅱ对试验性变态反应性脑脊髓炎大鼠TNFR 和IL-10 表达的影响
  • 前言
  • 材料与方法
  • 结果
  • 附图
  • 附表
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 综述一 肿瘤坏死因子及其受体与多发性硬化
  • 综述二 多发性硬化的免疫学机制及治疗
  • 致谢
  • 个人简历
  • 相关论文文献

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