论文摘要
背景与目的感染与慢性肾脏病的发生及进展密切相关。内毒素脂多糖（LPS）是由革兰氏阴性菌所产生,可直接或间接导致肾脏的损伤。内质网应激是细胞对各种有害刺激非常关键的应答机制,过度的内质网应激可引起细胞功能的异常甚至细胞的凋亡。糖调节蛋白78（GRP78）是内质网应激的标志蛋白,而凋亡信号分子CHOP参与了内质网应激途径中细胞的损伤与凋亡。目前内毒素脂多糖损伤肾小管上皮细胞中是否存在内质网应激的研究报道甚少。本实验采用不同浓度的内毒素脂多糖持续刺激培养的大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E细胞）不同的时间,采用RT-PCR方法检测内质网应激相关蛋白GRP78和凋亡信号分子CHOP转录活性的改变,以探讨内质网应激在内毒素脂多糖至大鼠肾小管上皮细胞损伤中的作用及其机制。方-法复苏大鼠肾小管上皮细胞株（NRK-52E细胞）,于含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素及100 U/ml链霉素的DMEM/F12 1:1培养液中,置于CO2培养箱37℃、5%CO2、95%湿度条件下进行培养,24-48h后,细胞生长至80%-90%融合时进行传代。待细胞再次生长至80%融合时,于不含胎牛血清的培养基中培养16h使其同步化后进行实验。将所培养细胞随机分为四组,分别加入不同浓度的内毒素脂多糖（Ong/ml, 10ng/ml, 100ng/ml, 1000ng/ml）进行刺激,分别于刺激12h、24h和36h提取细胞总RNA,并将各组总RNA逆转录为cDNA,PCR扩增后进行电泳检测GRP78和CHOPmRNA表达的变化。结果1.NRK-52E细胞在无内毒素脂多糖刺激时于培养不同时间GRP78和CHOPmRNA存在低量的基础表达,且随培养时间的变化,基础表达无显著变化。2. RT-PCR结果显示：较低浓度的内毒素脂多糖（1 Ong/ml）在较短的刺激时间（12h）内即可诱导NRK-52E细胞GRP78与CHOP mRNA高表达,与Ong/ml浓度刺激组相比,差异有统计学意义（P<0.01）。3. RT-PCR结果显示：培养基中内毒素脂多糖浓度愈高、刺激时间愈长,GRP78与CHOP mRNA表达愈高；在内毒素脂多糖100ng/ml, 1000ng/ml浓度刺激NRK-52E细胞12h、24h时,GRP78与CHOP mRNA表达显著高于LPS（0mg/ml,10ng/ml）组刺激12h、24h时,且差异有统计学意义（P<0.01）；在LPS 10ng/ml, 100ng/ml, 1000ng/ml刺激12h、24h、36h时,NRK-52E细胞GRP78与CHOP mRNA的表达显著高于LPS（0mg/ml）组刺激12h、24h、36h时,且差异有统计学意义（P<0.05）。而GRP78与CHOP mRNA的表达在高浓度LPS（1000ng/ml）刺激24h与36h时,相比均无显著差异（P>0.05）结论1.内毒素脂多糖可诱导NRK-52E细胞发生内质网应激。2.内毒素脂多糖诱导NRK-52E细胞GRP78与CHOP mRNA的表达呈剂量和时间依赖性。
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