论文摘要
目的:1、观察RNA干扰Survivin基因对腺样囊性癌移植瘤血管生成的影响。2、观察RNA干扰Survivin基因对腺样囊性癌移植瘤肿瘤细胞凋亡的影响。3、观察RNA干扰Survivin基因对腺样囊性癌移植瘤生长的影响。方法:1、建立腺样囊性癌移植瘤裸鼠模型:随机将30只,4～6周龄,体质量16～20 g, Balb/c雄性裸鼠分为6组,每组5只。即ACC-2细胞:肿瘤细胞组（皮下接种ACC-2细胞）、瘤体注射组（皮下接种ACC-2细胞,15d后行RNA干扰Survivin重组质粒瘤周瘤体注射）、质粒干扰组（皮下接种转染survivin基因RNA干扰质粒的ACC-2细胞）;ACC-M细胞:肿瘤细胞组（皮下接种ACC-M细胞）、瘤体注射组（皮下接种ACC-M细胞,15d后行RNA干扰Survivin重组质粒瘤周瘤体注射）、质粒干扰组（皮下接种转染survivin基因RNA干扰质粒的ACC-M细胞）。寄养于第三军医大学动物实验室,25天后全部裸鼠采用脊髓离断法处死,在无菌条件下,剥离瘤体除去包膜,部分瘤体组织以多聚甲醛溶液固定,待做石蜡包埋切片备用。部分瘤体组织迅速置液氮中保存,待行瘤体组织抽提总RNA备用。2、通过测量腺样囊性癌移植瘤体积大小,观察各组腺样囊性癌移植瘤生长情况。3、通过免疫组织化学检测各组腺样囊性癌移植瘤微血管参数情况。4、通过RT-PCR检测各组腺样囊性癌移植瘤促血管生成因子VEGF表达情况。5、通过TUNEL检测各组腺样囊性癌移植瘤肿瘤细胞凋亡情况。从而探讨RNA干扰survivin基因对人腺样囊性癌细胞移植瘤血管生成及瘤体生长的影响。结果:1、肿瘤细胞组瘤体生长迅速,呈倍数增长。瘤体注射组在15d前瘤体生长迅速,呈倍数增长,15d后行RNA干扰Survivin重组质粒作瘤体瘤周注射后瘤体生长明显减慢,非倍数增长。质粒干扰组瘤体生长缓慢,非倍数增长。分别用瘤体注射组和质粒干扰组与肿瘤细胞组作瘤体体积比较（如图1、2表1、2）,结果显示前两组腺样囊性癌移植瘤瘤体体积均较小,差异有统计学有意义（p<0.05）。瘤体注射组和质粒干扰组比较无统计学意义（P>0.05）。表明:通过RNA干扰Survivin基因可以有效地抑制腺样囊性癌移植瘤瘤体生长。2、在显微镜下观察各组腺样囊性癌移植瘤免疫组化组织切片,分别用瘤体注射组和质粒干扰组的有腔微血管密度、微血管密度、平均管周周长、平均管腔面积与肿瘤细胞组做比较（如表3、4）,结果显示前两组各项微血管参数值均较低,差异有统计学有意义（P<0.05）,瘤体注射组和质粒干扰组比较无统计学意义（P>0.05）。表明:通过RNA干扰Survivin基因可以抑制腺样囊性癌移植瘤血管生成,进而阻断了腺样囊性癌移植瘤发生发展所需营养和氧气的运输途径。3、分别用瘤体注射组、质粒干扰组与肿瘤细胞组进行VEGF电泳条带相对光密度值比较（如图5、6表5、6）,结果显示瘤体注射组和质粒干扰组的VEGF电泳条带相对光密度比值均偏低,差异有统计学有意义（P<0.05）,而质粒干扰组和瘤体注射组比较无统计学意义（P>0.05）。表明:通过RNA干扰Survivin基因能够下调腺样囊性癌移植瘤瘤体内促血管生成因子VEGF的表达,达到抑制腺样囊性癌移植瘤血管生成的目的。4、在共聚焦显微镜下观察各组腺样囊性癌移植瘤TUNEL组织切片,分别用瘤体注射组和质粒干扰组移植瘤凋亡肿瘤细胞的平均荧光值与肿瘤细胞组作比较（如图7、8表7、8）,结果显示前两组凋亡肿瘤细胞平均荧光值均较高。差异有统计学有意义（P<0.05）,而瘤体注射组和质粒干扰组比较无统计学意义（P>0.05）。表明:通过RNA干扰Survivin基因可以促进腺样囊性癌移植瘤肿瘤细胞的凋亡,达到抑制腺样囊性癌移植瘤瘤体生长的目的。结论:1、通过RNA干扰Survivin基因能够下调腺样囊性癌移植瘤体内促血管生成因子VEGF的表达,有效地抑制腺样囊性癌移植瘤血管生成。2、通过RNA干扰Survivin基因能够促进腺样囊性癌移植瘤肿瘤细胞凋亡,抑制腺样囊性癌移植瘤瘤体生长。因此,靶向Survivin基因采用RNA干扰技术,可通过下调腺样囊性癌移植瘤体内促血管生成因子VEGF的表达,抑制腺样囊性癌移植瘤肿瘤血管生成,也可通过促进腺样囊性癌移植瘤肿瘤细胞的凋亡,有效地抑制腺样囊性癌移植瘤瘤体生长和发展。
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标签：腺样囊性癌移植瘤论文; 血管生成论文; 细胞凋亡论文; 瘤体生长论文;