红树耐盐相关蛋白的分离和MALDI-TOF质谱鉴定

论文题目: 红树耐盐相关蛋白的分离和MALDI-TOF质谱鉴定

论文类型: 博士论文

论文专业: 作物遗传育种

作者: 彭存智

导师: 郑学勤

关键词: 红树,耐盐相关蛋白,双向电泳,质谱

文献来源: 华南热带农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本项目的目的就是希望能充分利用海南特有而丰富的红树林资源,从中选取理想的品种作为实验材料,迅速而又高效的分离和鉴定红树林植物耐盐相关蛋白。项目的成功,使海南丰富的红树林资源发挥出重要的种质资源库作用,为植物耐盐性的研究和应用开辟了一条新的道路。 本项目通过双向电泳技术分离在500 mmol/L NaCl溶液处理12天后表达量增加的蛋白质,再经过MALDI-TOF质谱鉴定和蛋白质数据库,检索同源的蛋白质,从而得到该蛋白的氨基酸序列。 通过对双向电泳图谱的初步观察可以看到,蛋白质主要集中在等电点5—8和分子量28KD—66KD之间。接着将蛋白质双向电泳图输入双向电泳分析软件进行分析,根据凝胶报告,红树幼苗叶片在淡水处理后的蛋白质双向电泳图中大约有904个蛋白点,NaCl溶液处理12天后的蛋白质双向电泳图中大约有967个蛋白点,其中蛋白点匹配成对的有790对。通过搜索软件分析后得到的蛋白点群柱状图,然后根据凝胶图像在视觉上直接观察和比较蛋白点,最终挑选出15个在NaCl溶液处理后表达量增加的蛋白点用于MALDI-TOF质谱鉴定,并将鉴定结果在蛋白质数据库中进行检索。结果表明,17#样品与(CATA3_SOYBN)Catalase 3的匹配分数是80,匹配显著,同时分子量和等电点pI比较接近,因此可以认为17#样品是(CATA3_SOYBN)Catalase 3;29#样品与(ATPB_CUSRE)ATP synthase beta chain的匹配分数是191,匹配显著,同时分子量和等电点pI比较接近,可以认为29#样品是(ATPB_CUSRE)ATP synthase betachain;53#样品和43#、45#、52#样品的肽段峰一样,应该是同一类蛋白。其中,53#样品与(RCA_ARATH)Splice isoform Short的匹配分数是78,达到了显著,可以认为53#样品是(RCA_ARATH)Splice isoform Short,但根据该蛋白的功能特点,(RCA_ ARATH)Splice isoform Short对耐盐方面的作用不是太大。其余49#、63#、64#、66#、85#、87#、88#和94#样品的MALDI-TOF质谱鉴定结果在蛋白质数据库中进行检索都没有得到可信的结果。

论文目录:

1.前言

1.1.植物耐盐机理研究进展

1.1.1.渗透调节

1.1.2.离子的平衡

1.1.3.水通道蛋白的调控

1.1.4.改变光合作用途径

1.1.5.抗氧化防御系统

1.2.植物耐盐细胞工程研究进展

1.3.植物耐盐基因工程及耐盐转基因工程研究进展

1.3.1.渗透胁迫保护剂相关基因：

1.3.2.离子平衡相关基因

1.3.3.水通道蛋白相关基因MipA、MipB、MipC

1.3.4.多胺类物质合成相关基因ADC、ODC、SAMDC

1.3.5.渗调蛋白相关基因NP24

1.3.6.晚期胚胎发生富集蛋白(LEA蛋白)相关基因

1.4.红树林植物盐诱导相关基因研究进展

1.5.蛋白质组学主要研究技术概述

1.5.1.特异性研究材料的获得——LMD技术

1.5.2.蛋白质的分离——双向电泳(2-DE)技术

1.5.3 蛋白质的鉴定——质谱(mass spectrometry)技术

2.材料与方法

2.1.实验材料的准备

2.1.1.实验材料的分布和选择

2.1.2.实验材料的处理和收集

2.2.实验方案设计和技术路线

2.3.实验方法

2.3.1.红树叶片蛋白质的提取(Phenol提取法，改良)

2.3.2.蛋白质的定量检测(Bradford改良法)

2.3.3.蛋白质双向电泳(2-D electrophorysis)

2.3.4.SDS-PAGE凝胶的检测

2.3.5.2—D凝胶图象分析

2.3.6.凝胶胶内原位酶解及MALDI-TOF质谱鉴定

3.结果分析

3.1.实验材料的处理

3.2.红树叶片蛋白质的提取

3.3.蛋白质的定量检测

3.4.蛋白质双向电泳及检测分析

3.4.1.散点图

3.4.2.蛋白点群的描述统计学分析

3.4.3.蛋白点群的柱状图

3.5.凝胶胶内原位酶解及MALDI-TOF质谱鉴定

3.6.MALDI-TOF质谱鉴定结果在蛋白质数据库中的检索

4.讨论

4.1.从蛋白质途径分离、克隆基因的可行性

4.2.实验材料的选取

4.3.红树叶片蛋白质的提取

4.4.所鉴定蛋白在耐盐机制中的功能研究及推测

5.结论

参考文献：

附录：各种主要试剂、溶液的配制

致谢

发布时间: 2005-07-27

参考文献

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• [2].感染马立克氏病病毒SPF鸡法氏囊蛋白质组学研究[D]. 卢占军.扬州大学2009
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