恬心汤对大鼠缺血再灌注时心肌细胞凋亡的保护作用及对Bcl-2、Bax表达影响的实验研究

论文摘要

近年来,研究发现细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤中心肌细胞死亡的机制之一。在心血管疾病治疗过程中,许多常用和新发展的治疗措施都不可避免地造成缺血再灌注损伤（IRI）,因此缺血再灌注时的心肌保护越来越成为心血管领域的研究热点。本实验采用血清学方法、病理学方法、免疫组织化学法等研究方法来观察恬心汤（TXT）对心肌缺血后再灌注损伤大鼠心肌酶、氧化应激因子、细胞凋亡调控基因的蛋白表达及心肌细胞结构学等的改变,多层次、多角度探讨TXT防治缺血再灌注损伤的作用机制,为该药的临床应用提供可靠的实验依据,为冠心病患者中医中药的临床复方用药治疗和预防提供新的思路和方法。目的:探讨恬心汤对实验性心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的保护机制。方法:实验前记录肢体Ⅱ导联心电图,检测正常者可入选,将入选的50只SD雄性大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,药物对照组及恬心汤大剂量治疗组（TXT max）和恬心汤小剂量治疗组（TXT min）,每组10只。各治疗组分别开始灌胃用药,空白组和模型组每次给予10ml/kg生理盐水,药物对照组给予硝酸异山梨酯2.5mg/kg,用生理盐水配成等体积混悬液,TXT max组和TXT min组分别给予含生药46.6g/kg,23.3g/kg汤剂,以上液体按10ml/kg灌胃,每日一次,连续7天,正常饮食。第8天除空白组外,其余4组大鼠均舌下静脉注射脑垂体后叶素（Pit）1U/kg,30 min尾静脉注射硝酸甘油（NG）1mg/kg复制心肌缺血再灌注模型,空白组舌下静脉注射等量生理盐水。各组均在舌下静脉注射Pit后30min时用20%乌拉坦5ml/kg腹腔注射麻醉,用心电图机标记Ⅱ导联。80min后断头取血,用全自动生化分析仪检测血清心肌酶,即肌酸激酶（CK）,乳酸脱氢酶（LDH）。血清超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）,SOD采用黄嘌呤氧化酶法测定,MDA采用TAB缩合比舌法测定。取心尖部心肌组织,进行苏木素-伊红（HE）染色,光镜下观察病理形态学改变。并采用免疫组化SP法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bax表达。结果:1心电图改变与实验前所做心电图相比,空白组心电图ST段接近等电位线,T波无明显降低。与空白组比较,模型组ST段压低及T波降低明显（P <0.01）,表明本次复制心肌缺血再灌注模型成功。与模型组比较,药物对照组和中药治疗组ST段及T波压低较小（P <0.01）,其中中药治疗组较药物对照组ST段及T波压低改善更为显著,有统计学意义（P <0.01）。但中药治疗组组间差异无统计学意义（P>0.05）。2血清心肌酶CK、LDH三项指标中,模型组较空白组均显著升高,有统计学意义（P <0.01）,与模型组比较,药物对照组和中药治疗组三项指标均降低,差异有统计学意义（P <0.01）,但药物对照组和TXT大小剂量组三组间差异无统计学意义（P>0.05）。3血清SOD、MDA模型组与空白组相比,MDA水平升高（P <0.01）。与模型组比较,药物对照组及两个中药治疗组较模型组水平明显降低（P <0.05或P <0.01）,但药物对照组及中药治疗组组间差异均无统计学意义（P>0.05）。模型组与空白组相比,SOD水平降低（P<0.01）。与模型组比较,药物对照组及两个中药治疗组较模型组水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,但药物对照组及中药治疗组组间差异均无统计学意义（P>0.05）。4组织病理损伤空白对照组未见明显的组织学改变;模型组以心肌大范细胞变圆或不规则,与周围组织脱离,细胞皱缩,核染色质密度增加,并呈颗粒状凝聚于核膜周围;药物对照组和TXTmin组较模型组改变轻微,以细胞变圆皱缩为主;TXTmax组的病理改变最轻,仅有少量细胞皱缩。5 Bcl-2和Bax表达与空白组比较,模型组大鼠Bax表达均明显升高,差异显著（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2表达均明显降低,差异显著（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较,各治疗组Bax表达都有不同程度的降低,其中大剂量组降低最多,药物对照组和小剂量组降低较少,但均有统计学意义（P<0.01）。药物对照组和小剂量组组间差异无统计学意义（P>0.01）。与模型组比较,各治疗组Bcl-2表达都有不同程度的升高,其中大剂量组差异最大,药物对照组和小剂量组差异较小,但均有统计学意义（P<0.01）。药物对照组和小剂量组间差异无统计学意义（P>0.01）。结论:恬心汤对大鼠心肌短暂缺血再灌注而引起的心肌损伤具有保护作用,并能改善心肌供血,通过调节缺血心肌Bax, Bcl-2基因的蛋白表达从而抑制和阻断细胞凋亡的发生。

论文目录

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• 研究论文 恬心汤对大鼠缺血再灌注时心肌细胞凋亡的保护作用及对Bcl-2、Bax 表达影响的实验研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 益气活血中药防治再灌注损伤心肌细胞凋亡的研究概述
• 致谢
• 个人简历