论文摘要
第一部分哮喘模型及β2受体减敏哮喘模型的构建目的构建哮喘动物模型及β2受体减敏哮喘动物模型,为研究β2受体减敏及其激素保护作用的机制奠定基础。方法BALB/c小鼠随机分成四组,每组8只。分别为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组（A组）,OVA致敏组（B组）,OVA+沙丁胺醇组（Sal）（C组）,OVA+沙丁胺醇（Sal）+地塞米松组（DXm）（D组）。B、C、D组小鼠分别于实验的第0,14和21天腹腔注射鸡OVA200μg和20mg氢氧化铝的混悬液200μl,第28天开始连续一周（每天30分钟）雾化吸入1%w/v OVA溶液;C组和D组小鼠在B组小鼠同样处理的基础上,在最后一周每天雾化吸入OVA之前腹腔注射60μg的沙丁胺醇和雾化吸入0.01%沙丁胺醇30分钟,在此基础上D组小鼠同时予以腹腔注射DXM 5mg/Kg/d,连续7天。A组小鼠腹腔注射等量的PBS,以PBS雾化吸入,作为对照。结果通过肺功能及一系列病理生理、病理形态学指标的检测,B组和C组小鼠的气道炎症程度明显重于A组和D组（p＜0.05）。C组的β2AR含量明显低于其他三组（p＜0.01）。结论成功构建了哮喘及β2受体减敏的哮喘动物模型。第二部分二维电泳及质谱分析目的通过比较蛋白质组学的方法研究β2AR减敏哮喘小鼠和哮喘小鼠以及β2AR减敏哮喘小鼠和激素保护的哮喘小鼠差异表达的蛋白质点,为探讨机制提供依据。方法提取各组小鼠肺组织总蛋白,进行等电聚焦和SDS-PAGE垂直电泳,分离各组蛋白。通过软件分析和统计处理,发现各组间差异的蛋白质点,再行质谱鉴定,最终确定β2AR减敏哮喘小鼠和哮喘小鼠以及β2AR减敏哮喘小鼠和激素保护的哮喘小鼠差异表达的蛋白质。结果β2AR减敏哮喘小鼠和哮喘小鼠有20个差异的蛋白质点,β2AR减敏组相对于哮喘组上调的有12个,下调的有8个,其中Rho-GDI2和Peroxiredoxin 5是我们重点关注的靶点。激素保护组和β2AR减敏组成功鉴定差异的蛋白质点有17个,相对于β2AR减敏哮喘组激素保扩组有13个蛋白质斑点上调,4个下调,其中Proteasome是我们感兴趣的靶点蛋白质。结论氧化应激和小G蛋白调节因子可能与β2AR减敏有关;蛋白酶体有可能参与激素对β2AR减敏的保护作用。第三部分免疫印迹验证目的通过免疫印迹法进一步确定质谱鉴定的结果,增加实验结果的可靠性和说服力。方法分别提取各组实验小鼠肺组织总蛋白,蛋白定量后,行抗原、抗体特异性结合的Western免疫印迹法验证Rho-GDI2、Peroxiredoxin 5和Proteasome,了解目标蛋白的变化。结果β2AR减敏哮喘组Rho-GDI2和Peroxiredoxin 5都明显上调;激素保护组Proteasome明显下调。结论免疫印迹法进一步验证了蛋白质组学的结果,说明了氧化应激和小G蛋白调节因子可能与β2AR减敏有关;蛋白酶体有可能参与激素对β2AR减敏的保护作用。