大豆异黄酮糖苷微生物转化的初步研究

论文摘要

本文研究并建立了大豆苷元和染料木素的提取分离以及定量的方法。首先用正己烷对豆粕脱脂,脱脂豆粕再用70%的乙醇提取,浓缩乙醇提取液至无醇,然后用与水相相同体积的乙酸乙酯萃取3次,合并并浓缩乙酸乙酯相。用GF254层析板,以甲苯—氯仿—丙酮（4:1.8:1.8）为展开剂对乙酸乙酯相进行薄层层析,并通过实验确定Rf=0.50的物质为大豆苷元,Rf=0.63的物质为染料木素,用紫外—可见分光光度法进行定量。在本实验条件下,大豆苷元和染料木素提取率的相对标准偏差分别为1.40%和0.87%,含量测量值的相对偏差分别为3.69%和3.52%。这表明本实验建立的大豆苷元和染料木素的提取分离方法稳定有效,定量方法准确可靠。通过判断大豆异黄酮糖苷是否水解或水解的程度来筛选大豆异黄酮糖苷分解菌时,要测定水解前后苷元含量的变化,整个过程比较复杂。在对样品进行薄层层析的过程中在Rf=0.82处发现了除大豆苷元和染料木素之外的第三条荧光斑,通过HPLC-PDA、质谱和显色反应分析确定其为大豆精醇,并证实了大豆精醇的有无或荧光的强弱可以作为判断大豆异黄酮糖苷是否水解或者水解程度的标志,大大简化了筛选大豆异黄酮糖苷分解菌的过程。本文还研究了经分离纯化得到的对大豆异黄酮糖苷水解率较高的黑曲霉N3对大豆异黄酮糖苷、p-NPG和栀子甙的水解情况,通过正交实验确定了黑曲霉N3对染料木苷的最佳酶解条件为温度=52℃、时间=12h、pH=4.5、Ca2+浓度=30 mmol·L-1,酶解率为41.42%,对大豆苷的最佳酶解条件为温度=52℃、时间=12h、pH=5.0、Ca2+浓度=60 mmol·L-1,酶解率为95.71%。N3黑曲霉菌产的酶对p-NPG有很好的酶解效果,但其对栀子甙的酶解率只有30.82%。黑曲霉N3对不同的糖苷表现出了不同的酶解效果,这可能是由不同糖苷的结构差异造成的。

论文目录

• 前言
• 1 实验材料
• 1.1 实验样品
• 1.2 实验原料
• 1.3 主要培养基及其制备方法
• 1.4 主要试剂
• 1.5 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 大豆苷元和染料木素提取、分离及定量方法的建立
• 2.1.1 绘制标准曲线
• 2.1.2 染料木素和大豆苷元的提取过程
• 2.1.3 染料木素和大豆苷元的分离
• 2.1.4 定性与定量
• 2.2 大豆异黄酮糖苷分解菌的筛选
• 2.2.1 大豆异黄酮糖苷分解菌的富集
• 2.2.2 大豆异黄酮糖苷分解菌的分离
• 2.2.3 菌株形态特性的观察
• 2.2.4 高效菌株的筛选
• 2.3 大豆异黄酮糖苷及其它糖苷的酶解
• 2.3.1 大豆异黄酮糖苷的酶解
• 2.3.2 其他糖苷的酶解
• 3 结果与分析
• 3.1 大豆苷元和染料木素提取、分离及定量方法的建立
• 3.1.1 绘制标准曲线
• 3.1.2 染料木素和大豆苷元的分离
• 3.1.3 HPLC色谱图分析和质谱分析
• 3.1.4 定量结果分析
• 3.2 大豆异黄酮糖苷分解菌的筛选
• 3.2.1 大豆异黄酮糖苷分解菌的分离和筛选
• 3菌株形态特征的观察'>3.2.2 N₃菌株形态特征的观察
• 3.3 大豆精醇的有无或荧光的强弱作为判断大豆异黄酮糖苷是否水解的标志
• 3.3.1 第三个荧光斑的发现
• 3.3.2 第三条荧光斑的定性分析
• 3.3.3 大豆精醇荧光的有无或强弱能否作为判断大豆异黄酮糖苷是否水解的标志
• 3.4 大豆异黄酮糖苷的酶解及其它糖苷的酶解
• 3.4.1 大豆异黄酮糖苷的酶解
• 3.4.2 其它糖苷的酶解
• 4 讨论
• 4.1 大豆苷元和染料木素提取、分离及定量方法的建立
• 4.2 大豆精醇的有无或荧光的强弱作为判断大豆异黄酮糖苷是否水解的标志
• 4.3 大豆异黄酮糖苷的酶解及其它糖苷的酶解
• 5 小结
• 文献综述——大豆异黄酮的研究进展
• 参考文献
• 发表文章
• 致谢