中药复方肺康灵对肺间质纤维化的改善作用及其机制研究

论文摘要

肺间质纤维化（Pulmonary Interstitial Fibrosis，PIF）是一组病因各异且具共同病理特征的一类肺破坏性疾病，其典型的病理特征是成纤维细胞过度增生、细胞外基质蛋白沉积沉积、肺组织结构变形、最终肺功能衰竭。近年，随着社会环境特别是大气污染的加重，其发病率逐年上升，但是由于缺乏有效的治疗策略，肺间质纤维化病人5年生存率明显低于50％。因此，探索有效治疗PIF的药物是当今医药界研究的热点。现代医学对PIF发病机理的研究表明，肺间质纤维化形成与TGF-β的表达及活性失控、Th1／Th2型细胞反应失衡、CD40／CD40配体（以下简称CD40／CD40L）系统所致的系列细胞反应密切相关。上述研究表明，肺间质纤维化是一个多因素诱发的疾病，因此，靶向多个靶点的治疗策略成为目前治疗肺间质纤维化的热点方向。中药是我国重要资源宝库，依据中医理论，通过近10万种复方倡导的基于中药复方多组分物质基础的联合疗法已有两千五百年的历史。采用中药复方对PIF进行多靶点的联合治疗可能会取得较好的疗效。但是大多数中药复方的有效成分尚不明了、作用机理尚待探究，限制其推广应用。因此，利用现代科学技术手段，结合多学科研究方法，探索中药复方的有效成分和作用机制，成为中药复方科学使用的必要条件。肺康灵是依据中医传统理论组建的中药复方，在临床进行了基于病症的疗效观察，发现肺康灵对肺间质纤维化各综合症状均有较好的改善作用，其中58例临床病人疗效观察，总有效率达致68％。为了进一步阐明肺康灵中药复方的有效成分、探明其具体作用机制，本文在两项国家自然基金项目的支持下，利用利用现代生物技术、蛋白质组学技术及现代药理学技术，结合现代医学对肺间质纤维化的认识，对中药复方的作用机制和分子靶点进行了深入系统的研究。在体外，采用血清药理学方法，以肺巨噬细胞培养上清、TGF-β作为诱导剂，采用MTT法，流式细胞术，激光共聚焦显微镜等多种方法，在体外观察了肺康灵对肺巨噬细胞培养上清、TGF-β诱导的human embryo pulmonary fibroblast（HEPF）细胞增殖的抑制作用。结果发现，肺康灵可以明显抑制肺巨噬细胞培养上清、TGF-β诱导的HEPF细胞的增殖。进一步研究表明肺康灵可以明显提高Ⅰ型细胞因子生成，而减少Ⅱ型细胞因子含量，减少炎性因子产生，从而发挥肺康灵的抗肺纤维化作用。体内通过气管注射博来霉素复制大鼠肺纤维化模型，肺康灵能较明显的抑制肺泡巨噬细胞分泌细胞因子的作用。组织病理形态学结果显示肺康灵能够减轻肺炎症细胞浸润，减少成纤维细胞增殖及胞外基质沉积，从而减弱肺纤维化的程度。提示，肺康灵对肺纤维化具有明显的治疗作用。进一步分析发现，肺康灵抗肺间质纤维化的主要活性成分为多糖类组分。为了深入探讨其作用机制，本文整合亲和层析、质谱、SDS-PAGE、western blot、免疫沉淀、共定位、SPR等方法，结合复合多糖生物芯片等现代生物、蛋白质组及药理学技术体系，发现肺康灵的主要活性组分多糖能同时靶向TGF-β和RIP1蛋白发挥其抑制TGF-β及CD40系统的相关信号传导、减少炎性细胞因子的释放、纠正Th1／Th2的失衡，最终发挥其抗肺间质纤维化作用。本文首次通过集成的技术体系，从多个角度，利用多种方法，比较系统系统地揭示中药复方肺康灵抗肺间质纤维化的作用和分子机制，为肺间质纤维化的药物治疗开辟新途径。本项研究将具有重要的理论意义和应用开发价值。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 中药复方肺康灵对博来霉素诱导的大鼠肺间质纤维化模型的改善作用
• 1 前言
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 4 实验结果
• 5 讨论
• 第二章 中药复方肺康灵对肺成纤维细胞模型的影响
• 1 前言
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 4 实验结果
• 5 讨论
• 第三章 中药复方肺康灵抗肺间质纤维化作用的分子机制及其靶点确证
• 1 前言
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 4 实验结果
• 5 讨论
• 第四章 中药复方肺康灵对肺间质纤维化病人的临床改善作用
• 1 前言
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 综述1
• 参考文献
• 综述2
• 参考文献