紫薄鳅染色体核型和遗传多样性研究

论文摘要

紫薄鳅（Leptobotia taeniops）是中国特有淡水鱼类品种，它体型小，属底栖性鱼类。其肉质鲜嫩，营养丰富，体色斑斓，具有较高的经济价值和观赏价值。文中对源自长江铜陵段的紫薄鳅，取其头肾为材料，采用植物血凝素（phytohaemagg lutinin，PHA）和秋水仙碱体内直接注射法制备紫薄鳅染色体标本，并分析染色体的核型；通过线粒体DNA控制区和简单序列重复区间扩增多态性（Inter-simple sequence repeat, ISSR）标记技术，研究紫薄鳅不同体色的两个子群体的遗传多样性。研究结果如下：1.紫薄鳅二倍体染色体数目为2n=50，核型公式为：6m+10sm+8st+26t，臂数为66。2.采用PCR技术和DNA测序技术对紫薄鳅线粒体控制区的遗传多样性进行分析，获得用于分析的控制区片段约961bp。27个样本中共检测到18个变异位点和14种单倍型，单倍型多样性指数和核苷酸多样性指数分别为0.8661和0.0038，单倍型的平均遗传距离为0.0052。子群体Q的单倍型多样性指数和核苷酸多样性指数分别为0.8180和0.0037，遗传距离为0.0037；子群体S的单倍型多样性指数和核苷酸多样性指数分别为0.9000和0.0042，遗传距离为0.0041，群体间的Gst值为0.0068。结果表明，紫薄鳅的遗传多样性较低，子群体S的遗传多样性比子群体Q的稍高，群体间遗传分化程度低。3．试验中，用筛选出的11个ISSR引物对两个群体共74尾紫薄鳅进行遗传多样性分析，总体水平的基因多样性值和shannon信息指数分别为0.1276和0.2129，多态位点比例为60.56%；子群体Q的基因多样性值和shannon信息指数分别为0.1051和0.1794，多态位点比例为53.52%；群体S的基因多样性值和shannon信息指数分别为0.1298和0.2135，多态位点比例为56.34%。结果表明：紫薄鳅群体遗传多样性较低，子群体S的遗传多样性比子群体Q的略高；两个子群体之间的遗传距离为0.0218，Gst为0.0752，表明S和Q群体间的遗传分化程度较低，亲缘关系较近。研究结果丰富了紫薄鳅细胞遗传学参数，为紫薄鳅的种质检测提供了相应技术参数，这不仅为紫薄鳅的种质资源保护、系统演化、进化地位、生化遗传研究提供理论依据，而且为紫薄鳅的野生驯化与遗传育种工作提供了技术设计思路。

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Abstract

文献综述

1.紫薄鳅研究进展

2. 遗传多样性的研究方法

2.1 遗传多样性

2.2 鱼类遗传多样性研究方法

2.2.1 形态学方法

2.2.2 细胞学方法

2.2.3 蛋白质检测方法

2.2.4 分子水平标记方法

3 鱼类线粒体控制区基因标记概述

3.1 鱼类线粒体 DNA 基本结构

3.2 鱼类线粒体 DNA 的遗传特性

3.3 鱼类线粒体 DNA 控制区的结构特点

3.4 线粒体控制区基因标记在鱼类研究中的应用

4 ISSR 分子标记在鱼类研究中的应用

4.1 ISSR 分子标记

4.2 ISSR 在鱼类研究中的应用

引言

1. 材料与方法

1.1 紫薄鳅染色体核型分析

1.1.1 试验材料

1.1.2 仪器设备与试剂

1.1.3 试验方法

1.2 紫薄鳅线粒体控制区遗传多样性

1.2.1 试验材料

1.2.2 仪器设备与试剂

1.2.3 试验方法

1.3 紫薄鳅 ISSR 分析

1.3.1 试验材料

1.3.2 仪器设备与试剂

1.3.3 试验方法

2. 结果与分析

2.1 紫薄鳅染色体核型分析

2.1.1 染色体数目

2.1.2 染色体核型

2.2 基于线粒体控制区遗传多样性分析

2.2.1 DNA 提取与控制区扩增

2.2.2 紫薄鳅 mtDNA 控制区碱基组成

2.2.3 紫薄鳅 mtDNA 控制区的序列变异

2.2.4 紫薄鳅 mtDNA 控制区的遗传分析

2.3 基于 ISSR 分子标记遗传多样性分析

2.3.1 ISSR 反应体系的优化

2.3.2 引物筛选

2.3.3 ISSR 扩增结果分析

2.3.4 ISSR 遗传多样性分析

3. 讨论

3.1 紫薄鳅染色体核型分析

3.1.1 染色体制备方法

3.1.2 染色体核型比较

3.2 紫薄鳅线粒体控制区的遗传变异

3.2.1 紫薄鳅线粒体控制区序列碱基组成

3.2.2 紫薄鳅线粒体控制区遗传多样性

3.3 紫薄鳅 ISSR 标记的遗传变异

3.3.1 紫薄鳅 ISSR 引物的筛选

3.3.2 紫薄鳅遗传多样性的 ISSR 分析

4. 结论

参考文献

附录

致谢

作者简历

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